生物発光細菌のイメージング<emインビボで></em
Summary
この記事はの管理について説明し<em>ルクスタグ付き</em>マウスに細菌およびその後<em生体内で></emIVISの生物発光イメージングを用い>分析。
Abstract
このビデオでは、がんの遺伝子と細胞療法における細菌の使用に重点を置いて、生きたマウスにおける細菌人身売買の研究のための全身bioluminesceイメージング（BLI）の使用について説明します。細菌が全身投与後に腫瘍内に優先的に成長する天然の能力を有する、癌治療のためのベクターの魅力的なクラスを紹介します。細菌はバクテリアと同時に腫瘍部位のlux遺伝子カセット許可BLIの検出を発現するように設計。時間をかけて腫瘍内の場所や細菌のレベルを容易に調べることができ、2または3次元で可視化した。この方法は、細菌種と腫瘍異種移植片タイプの広い範囲に適用されます。この記事では、皮下腫瘍を有するマウス内生物発光細菌の分析のためのプロトコルについて説明します。 BLIによる胃腸管（GIT）内共生細菌の可視化についても説明しています。この強力な、そして安価、リアルタイムイメージング戦略representsのがん研究、特に遺伝子治療において、感染症の文脈におけるin vivoでの細菌の研究のための理想的な方法。このビデオでは、 ルクスタグ付きEを研究するための手順の概要を説明IVISシステムと空間的および時間的な読み出し達成可能な利用のBLIを示す生きたマウスで、 大腸菌 、。
Protocol
1。腫瘍誘導ルーチン腫瘍誘発については、無血清培地を200μlに懸濁された細胞の腫瘍形成性最小用量は、感染フリー6〜8週齢の雌BALB / cまたは無胸腺MF1-nu/nuマウスの脇腹に皮下（sc）注射したN = 21ゲージの注射針を用いて6（ハーラン、オックスフォード、英国）（1×10 6 4T1細胞）。血球計およびトリパンブルー色素排除（Gibco）を用いて、視覚カウントによって決定された接種…
Discussion
遺伝子治療の文脈では、患者への治療遺伝子の送達のための生物学的製剤の使用は、非常に有望3-5で示されている。ウイルスと同様に、細菌の生得的な生物学的特性は、特に癌の文脈では、細胞または組織への効率的なDNA送達を可能にする。これは、いずれかの外部（非侵襲種）または腫瘍細胞（病原体）内の、全身局所的に複製から高い評価を得て投与した場合、細菌は腫瘍にホ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、欧州委員会第7次フレームワーク計画（PIOF-GA-2009から255466）、およびアイルランドの健康研究会（HRA_POR/2010/138）からこの原稿に関連する支援を承諾したいと思います。 ルクス -タグE.大腸菌は博士コーマックガーン、コーク大学から親切な贈り物だった。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 4T1 cell line | ATCC | CRL-2539 | Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D. | |
| Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Growth medium for E. coli |
| Erythromycin | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotic |
| Streptomycin | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotic |
| MF1nu/nu mice | Harlan (UK) | 069(nu)/070(nu/+) | Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu |
| Balb/c mice | Harlan (UK) | 066 | Haplotype: H-2d |
| Gavage needle | Vet-tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm straight gavage needle |
| Syringe for IV injection | BD BioSciences | 309309 – 1 ml | Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle. |
| Syringe for tumor inoculation | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ inch needle |
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Bioluminescent Bacterial ImagingIn VivoWhole Body ImagingBLIBacterial TraffickingGene TherapyCell TherapyCancerLux Gene CassetteTumor DetectionTwo Or Three DimensionsBacterial SpeciesTumor XenograftSubcutaneous Tumor Bearing MiceVisualizationCommensal BacteriaGastrointestinal Tract (GIT)Real-time ImagingGene Therapy ResearchInfectious Disease ResearchLux-tagged E. ColiSpatial And Temporal ReadoutIVIS System
Citer Cet Article
Baban, C. K., Cronin, M., Akin, A. R., O’Brien, A., Gao, X., Tabirca, S., Francis, K. P., Tangney, M. Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo. J. Vis. Exp. (69), e4318, doi:10.3791/4318 (2012).