Summary

Återkommande herpetisk stromal keratit hos möss, en modell för att studera mänskliga HSK

Published: December 18, 2012
doi:

Summary

De flesta studier av herpetisk hornhinnan sjukdomar använder en primär infektion modell. Emellertid primär infektion med HSV-1 inte normalt leda till human sjukdom. Här beskriver vi en återkommande modell för herpetisk hornhinnan sjukdom som närmare efterliknar mänsklig sjukdom.

Abstract

Herpetisk ögonsjukdom, kallas herpetisk stromal keratit (HSK), är en potentiellt bländande infektion i hornhinnan som resulterar i över 300.000 kliniska besök varje år för behandling. Mellan 1 och 2 procent av de patienter med klinisk sjukdom kommer att uppleva synförlust den infekterade hornhinnan. De allra flesta av dessa fall är resultatet av reaktivering av en latent infektion av herpes simplex typ I-virus och inte på grund av akut sjukdom. Intressant nog är den akuta infektionen modellen oftast används för att studera denna sjukdom. Dock det kändes att en återkommande modell av HSK skulle vara mer reflekterande av vad som sker under klinisk sjukdom. De återkommande djurmodeller för HSK har använt både kaniner och möss. Fördelen med kaniner är att de upplever reaktivering från latens frånvarande någon känd stimulans. Som sagt, det är svårt att undersöka den roll som många immunologiska faktorer spelar i återkommande HSK eftersom kaninen modellen inte har Immunmiologiska och genetiska resurser att musen har. Vi valde att använda musmodell för återkommande HSK eftersom det har fördelen av att det finns många resurser tillgängliga och även vi vet när reaktivering sker eftersom reaktivering induceras av exponering för UV-B-ljus. Hittills har denna modell får dessa laboratorier använder den för att definiera flera immunologiska faktorer som är viktiga för denna sjukdom. Det har också gett oss möjlighet att testa både terapeutisk och vaccin effekt.

Protocol

Animal Care Anmärkning: Analgetika används inte i denna modell eftersom de är anti-inflammatoriska och därmed skulle ogiltig modellen. 1. Framställning av virus Grow HSV-1 på Vero-celler (80% sammanflytande) med en start utspädning av 0,01 multiplicitet av infektion (i T-150-kolv, omkring 5 x 10 5 plackbildande enheter) under 3-4 dagar tills alla celler har rundade upp och kan lätt rubbas genom att träffa kolven. Ta media till sterila centrifugrör och c…

Discussion

Den återkommande modellen av herpetisk stromal keratit (HSK) beskrivs här gör det möjligt för utredaren att studera människans HSK i en modell som är mer i linje med vad som observeras under mänskliga sjukdomar. Således modellens styrkor är att sjukdomen förekommer i samband med ett immunförsvar som redan genom stimulerad under grundsjukdomen. Eftersom dessa möss har redan ett immunsvar mot HSV-1, de faktorer som återaktivera att immunsvaret är sannolikt skiljer sig från dem som ursprungligen genererade …

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Författarna vill tacka Dr Jay Pepose för att hjälpa lära modellen för oss. Detta arbete stöddes av National Institutes of Health bidrag EY11885 (PMS), EY21247 (PMS) och en obegränsad bidrag från forskning att förebygga blindhet för Ögonkliniken.

Materials

DMEM Sigma D5796
Fetal Bovine Serum Atlanta Biologicals S11150
Human Serum Sigma S7023
L-Glutamine Cellgro 25-005-C1
Pen/ Strep Sigma P4333
Fungizone Invitrogen 15290018
Centrifuge Sorvall Legend RT
Centrifuge Beckman 52-21
Transilluminatior UVP 95-0452-02
Sonicatior Branson Sonifier 450
Oak Ridge Tubes Nalgene Z 720410
Flasks- 7150 Corning 430823
Plates- 12 well Corning CLS 3513
Plates- 48 well Corning CLS 3548
Sterile Conical Tubes- 30 ml Corning CLS 430828
Sterile Cotton-tipped Applicators Fisher 23-400-125
30G Needles Becton-Dickinson 305106
25G Needles BD 305122
10 ml Syringe BD 309602
10 ml Syringe BD 309604

References

  1. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice. Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).
  2. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic eye disease in mice. J. Gen. Virol. 71, 397-404 (1990).
  3. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Passive immunization protects the mouse eye from damage after herpes simplex virus infection by limiting spread of virus in the nervous system. J. Gen. Virol. 71, 681-687 (1990).
  4. Laycock, K. A., Lee, S. F., Brady, R. H., Pepose, J. S. Characterization of a murine model of recurrent herpes simplex viral keratitis induced by ultraviolet B radiation. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32, 2741-2746 (1991).
  5. Keadle, T. L., Stuart, P. M. IL-10 ameliorates corneal disease in a mouse model of recurrent herpetic keratitis. Microbial Path. 38, 13-21 (2005).
  6. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Miller, J. K., Hook, K. K., Fenoglio, E. D., Francotte, M., Slaoui, M., Stuart, P. M., Pepose, J. S. Efficacy of a recombinant glycoprotein D subunit vaccine on the development of primary and recurrent ocular infection with herpes simplex virus type 1 in mice. J. Inf. Dis. 176, 331-338 (1997).
  7. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Proinflammatory cytokines IL-1 and TNF-a are required for recurrent herpetic keratitis in NIH mice. Invest. Ophth. Vis. Sci. 41, 96-102 (2000).
  8. Keadle, T. L., Usui, N., Laycock, K. A., Kumano, Y., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Corneal cytokine expression in a murine model recurrent herpetic stromal keratitis. Ocular Immunol. Inflam. 9, 193-205 (2001).
  9. Keadle, T. L., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. CD4+ and CD8+ cells are key participants in the development of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. Microbial Path. 32, 255-262 (2002).
  10. Keadle, T. L., Morrison, L. A., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic immunization with a virion host shutoff-defective, replication-incompetent herpes simplex virus type 1 strain limits recurrent herpetic ocular infection. J. Virol. 76, 3615-3625 (2002).
  11. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Morris, J. L., Leib, D. A., Morrison, L. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic vaccination with vhs(-) herpes simplex virus reduces the severity of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. J. Gen. Virol. 83, 2361-2365 (2002).
  12. Keadle, T. L., Morris, J. L., Stuart, P. M. The effects of aminoguanidine on primary and recurrent ocular herpes simplex virus infection. Nitric Oxide. 13, 247-253 (2005).
  13. Stuart, P. M., Morris, J. E., Sidhu, M., Keadle, T. L. CCL3 protects mice from corneal pathology during recurrent HSV-1 infection. Front. Biosci. 13, 4407-4415 (2008).
  14. Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis. Virology. 380, 46-51 (2008).
  15. Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways. J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).

Play Video

Citer Cet Article
Morris, J., Stuart, P. M., Rogge, M., Potter, C., Gupta, N., Yin, X. Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK. J. Vis. Exp. (70), e4276, doi:10.3791/4276 (2012).

View Video