Summary

Рецидивирующей герпетической Стромальные Кератит у мышей, модель для изучения человека HSK

Published: December 18, 2012
doi:

Summary

Большинство исследований герпетические заболевания роговицы использовать основной модели инфекции. Тем не менее, первичной инфекции ВПГ-1, как правило, не приводят к болезни человека. Здесь мы опишем периодически модели герпетического заболевания роговицы, которые более точно имитирует человеческую болезнь.

Abstract

Герпетическая болезнь глаз, называемый герпетический кератит стромальных (HSK), является потенциально ослепительно инфекции роговицы, что приводит к более 300.000 клинических посещений каждый год на лечение. От 1 до 2 процентов пациентов с клиническим заболеванием будет испытывать потерю зрения зараженных роговицы. Подавляющее большинство этих случаев являются результатом реактивации латентной инфекции простого герпеса первого типа вируса, а не в связи с острым заболеванием. Интересно, что острой инфекции является модель наиболее часто используется для изучения этого заболевания. Тем не менее, было отмечено, что периодически модели HSK бы лучше отражают то, что происходит во время клинической картины заболевания. Очередная животных моделей для HSK использовали как кроликов и мышей. Преимущество кроликов является то, что они испытывают реактивации с задержкой в ​​отсутствие какого-либо известного стимула. Тем не менее, трудно изучить роль, что многие иммунологические факторы играют в периодических HSK потому что кролик модель не имеет иммунгические и генетические ресурсы, что мышь имеет. Мы решили использовать модель мыши для повторного HSK потому что она имеет то преимущество, существует много ресурсов, а также мы знаем, когда возобновление будет происходить, потому что реактивация индуцируется под воздействием UV-B света. До сих пор эта модель позволила тех лабораторий, использующих его для определения нескольких иммунологических факторов, которые важны для этой болезни. Это также позволило нам проверить, как терапевтический и эффективности вакцины.

Protocol

Примечание уходу за животными: Анальгетики не используются в данной модели, поскольку они являются противовоспалительными и таким образом не повлияет на модель. 1. Подготовка Вирус Расти HSV-1 на клетках Веро (80% вырожденная) с использованием начиная разбавления 0,01 мн?…

Discussion

Очередная модель герпетического кератита стромальных (HSK), описанные здесь, позволяет следователю для изучения человеческих HSK в модели, которая в большей степени соответствует тому, что наблюдается при болезни человека. Таким образом, сильные модели в том, что заболевание возникает в ?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Авторы хотели бы поблагодарить д-ра Джей Pepose за помощь в обучении модели нам. Эта работа была поддержана Национальным институтом здоровья грантов EY11885 (ПМС), EY21247 (PMS) и неограниченный грант от исследований в области профилактики слепоты в отделение офтальмологии.

Materials

DMEM Sigma D5796
Fetal Bovine Serum Atlanta Biologicals S11150
Human Serum Sigma S7023
L-Glutamine Cellgro 25-005-C1
Pen/ Strep Sigma P4333
Fungizone Invitrogen 15290018
Centrifuge Sorvall Legend RT
Centrifuge Beckman 52-21
Transilluminatior UVP 95-0452-02
Sonicatior Branson Sonifier 450
Oak Ridge Tubes Nalgene Z 720410
Flasks- 7150 Corning 430823
Plates- 12 well Corning CLS 3513
Plates- 48 well Corning CLS 3548
Sterile Conical Tubes- 30 ml Corning CLS 430828
Sterile Cotton-tipped Applicators Fisher 23-400-125
30G Needles Becton-Dickinson 305106
25G Needles BD 305122
10 ml Syringe BD 309602
10 ml Syringe BD 309604

References

  1. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice. Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).
  2. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic eye disease in mice. J. Gen. Virol. 71, 397-404 (1990).
  3. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Passive immunization protects the mouse eye from damage after herpes simplex virus infection by limiting spread of virus in the nervous system. J. Gen. Virol. 71, 681-687 (1990).
  4. Laycock, K. A., Lee, S. F., Brady, R. H., Pepose, J. S. Characterization of a murine model of recurrent herpes simplex viral keratitis induced by ultraviolet B radiation. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32, 2741-2746 (1991).
  5. Keadle, T. L., Stuart, P. M. IL-10 ameliorates corneal disease in a mouse model of recurrent herpetic keratitis. Microbial Path. 38, 13-21 (2005).
  6. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Miller, J. K., Hook, K. K., Fenoglio, E. D., Francotte, M., Slaoui, M., Stuart, P. M., Pepose, J. S. Efficacy of a recombinant glycoprotein D subunit vaccine on the development of primary and recurrent ocular infection with herpes simplex virus type 1 in mice. J. Inf. Dis. 176, 331-338 (1997).
  7. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Proinflammatory cytokines IL-1 and TNF-a are required for recurrent herpetic keratitis in NIH mice. Invest. Ophth. Vis. Sci. 41, 96-102 (2000).
  8. Keadle, T. L., Usui, N., Laycock, K. A., Kumano, Y., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Corneal cytokine expression in a murine model recurrent herpetic stromal keratitis. Ocular Immunol. Inflam. 9, 193-205 (2001).
  9. Keadle, T. L., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. CD4+ and CD8+ cells are key participants in the development of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. Microbial Path. 32, 255-262 (2002).
  10. Keadle, T. L., Morrison, L. A., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic immunization with a virion host shutoff-defective, replication-incompetent herpes simplex virus type 1 strain limits recurrent herpetic ocular infection. J. Virol. 76, 3615-3625 (2002).
  11. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Morris, J. L., Leib, D. A., Morrison, L. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic vaccination with vhs(-) herpes simplex virus reduces the severity of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. J. Gen. Virol. 83, 2361-2365 (2002).
  12. Keadle, T. L., Morris, J. L., Stuart, P. M. The effects of aminoguanidine on primary and recurrent ocular herpes simplex virus infection. Nitric Oxide. 13, 247-253 (2005).
  13. Stuart, P. M., Morris, J. E., Sidhu, M., Keadle, T. L. CCL3 protects mice from corneal pathology during recurrent HSV-1 infection. Front. Biosci. 13, 4407-4415 (2008).
  14. Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis. Virology. 380, 46-51 (2008).
  15. Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways. J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).

Play Video

Citer Cet Article
Morris, J., Stuart, P. M., Rogge, M., Potter, C., Gupta, N., Yin, X. Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK. J. Vis. Exp. (70), e4276, doi:10.3791/4276 (2012).

View Video