Summary

Ricorrente cheratite erpetica Stromal in Mouse, un modello per lo studio HSK umano

Published: December 18, 2012
doi:

Summary

La maggior parte degli studi sulla malattia erpetica corneale utilizzare un modello di infezione primaria. Tuttavia, l'infezione primaria con HSV-1 non tipicamente portare a malattie umane. Qui si descrive un modello ricorrente della malattia erpetica corneale, che più da vicino imita malattia umana.

Abstract

Malattie degli occhi erpetica, chiamato cheratite erpetica stromale (HSK), è un'infezione potenzialmente accecante della cornea che si traduce in oltre 300.000 visite cliniche ogni anno per il trattamento. Tra 1 e 2 per cento di quei pazienti con malattia clinica sperimenterà perdita della vista della cornea infetto. La grande maggioranza di questi casi sono il risultato di riattivazione di una infezione latente da herpes simplex virus di tipo I e non causa di malattia acuta. È interessante notare che l'infezione acuta è il modello più utilizzato per studiare questa malattia. Tuttavia, si è ritenuto che un modello ricorrente di HSK sarebbe più riflettente di ciò che avviene durante la malattia clinica. I modelli animali ricorrenti per HSK hanno utilizzato entrambi i conigli e topi. Il vantaggio di conigli è che essi sperimentano riattivazione dalla latenza in assenza di qualsiasi stimolo noto. Detto questo, è difficile esplorare il ruolo che molti fattori immunologici giocare in HSK ricorrenti in quanto il modello di coniglio non ha la immungici e le risorse genetiche che il mouse ha. Abbiamo scelto di utilizzare il modello di topo per HSK ricorrenti in quanto ha il vantaggio che vi siano molte risorse disponibili e anche sapere quando riattivazione avverrà perché riattivazione è indotta da esposizione a luce UV-B. Finora, questo modello ha permesso a tali laboratori di utilizzarlo per definire diversi fattori immunologici che sono importanti per questa malattia. Ha inoltre permesso di testare sia terapeutica e l'efficacia del vaccino.

Protocol

Cura degli animali Nota: Gli analgesici non sono utilizzati in questo modello in quanto sono anti-infiammatori e quindi si invaliderebbe il modello. 1. Preparazione di virus Grow HSV-1 su cellule Vero (80% confluenti) utilizzando una diluizione iniziale di 0,01 molteplicità di infezione (in T-150 beuta, circa 5 x 10 5 unità formanti placca) per 3-4 giorni finché tutte le celle sono arrotondate-up e sono facilmente sloggiato colpendo il pallone. Rimuovere i sup…

Discussion

Il modello ricorrente di erpetica cheratite stromale (HSK) qui descritto consente al ricercatore di studiare HSK umano in un modello che è più coerente con quella che si osserva durante la malattia umana. Così, i punti di forza del modello sono che la malattia si verifica nel contesto di un sistema immunitario che ha già da stimolati durante la malattia primaria. Poiché questi topi già hanno una risposta immunitaria a HSV-1, i fattori che riattivano risposta immunitaria che sono probabilmente diverse da quelle che…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Gli autori desiderano ringraziare il Dr. Jay Pepose per aiutare insegnare il modello da noi. Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institutes of Health sovvenzioni EY11885 (PMS), EY21247 (PMS) e una sovvenzione illimitata di ricerca per prevenire la cecità al Dipartimento di Oftalmologia.

Materials

DMEM Sigma D5796
Fetal Bovine Serum Atlanta Biologicals S11150
Human Serum Sigma S7023
L-Glutamine Cellgro 25-005-C1
Pen/ Strep Sigma P4333
Fungizone Invitrogen 15290018
Centrifuge Sorvall Legend RT
Centrifuge Beckman 52-21
Transilluminatior UVP 95-0452-02
Sonicatior Branson Sonifier 450
Oak Ridge Tubes Nalgene Z 720410
Flasks- 7150 Corning 430823
Plates- 12 well Corning CLS 3513
Plates- 48 well Corning CLS 3548
Sterile Conical Tubes- 30 ml Corning CLS 430828
Sterile Cotton-tipped Applicators Fisher 23-400-125
30G Needles Becton-Dickinson 305106
25G Needles BD 305122
10 ml Syringe BD 309602
10 ml Syringe BD 309604

References

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Citer Cet Article
Morris, J., Stuart, P. M., Rogge, M., Potter, C., Gupta, N., Yin, X. Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK. J. Vis. Exp. (70), e4276, doi:10.3791/4276 (2012).

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