Bir Zebra balığı Düzenli Bakım ve Onarım (<em> Br.rerio</em>) Laboratuvar: An Introduction

1. Sistem Bakım Zebra balığı sürekli filtreleri sirkülasyon sistemi tutulur ve sağlıklı bir su ortamı için gerekli olan su kalitesini korumak için sistem suyu havalandırır edilir. Sirkülasyon sistemi ayrıca aşırı gıda ve balık dışkısı filtrelemeye yardımcı olmaktadır. Farklı şirketlerin zebrafish sistemleri sağlamak ama bizim laboratuvarda, ABD Sucul Habitatlar gelen sistemleri kullanırlar. (: Karanlık ışık) Oda sıcaklığı veya tank sıcaklığı genellikle 26-28,5 ° C ve aydınlatma koşulları 14:10 saattir korunur. Sucul Habitatlar A zebrafish sistemi (örneğin, Tezgahüstü sistemi) maliyetlerini ~ 9.000 USD. İki raflı Bu benchtop sistemi her rafta altı 10 litre, 3 litre oniki ya da yirmi 1.5-litrelik tanklar tutabilir. Balık Çoklu çizgiler (örneğin, transgenik, mutant, vahşi tip) de aynı sistem üzerinde yerleştirilebilir. Filtre farklı bir dizi sistem kullanılmaktadır. Tüm tankları PA Sistemimizde, su120 mikron filtre pedi, 50 mikron dış filtre, biyolojik filtre, aktif karbon emilimi filtre ve UV dezenfeksiyon filtresi aracılığıyla sses önce tankın içine geri sirküle ediliyor. De-chlorinated/aged su zebrafish sisteminde kullanılmaktadır. Su en az 48 saat boyunca yaşlanma ile de-klorlu edilebilir. İdeal koşullar altında, su sıcak tutmak için su sirkülasyon pompa ile bir rezervuar tutulur ve de-klorlama hızlandırmak olmalıdır. Sistem suyunun pH günlük olarak kontrol edildi ve 6.8 ve 7.5 arasında muhafaza edilmelidir. Gerekli olduğunda, sodyum bikarbonat, pH arttırmak için kullanılabilir. Balık tankları düzenli olarak temizlenmelidir. , Bir balık tankı temizlemek bu tanka su akışını kapatmak, geriye eğerek tank tarafından fazla suyu boşaltın ve sistemin dikkatlice depo kaldırmak için. Kir ve yosun tankı ve alt tarafta belirgin olacaktır. Temiz bir tanka bölme yerleştirin, ve de-klorlu su (aka Sistemi wa ile doldurmakTer). Dikkatlice bir balık ağı ile bu tankın içine balık aktarın. Kapağını kapatın ve tank ad etiketi aktarın. Dikkatlice sistemi içine temiz tanka yerleştirin ve su beslemesini açın. % 70 etanol ile balık ağı, sprey dezenfekte etmek için, su ile durulayın ve tekrar kullanmadan önce kurumasını bekleyin. Kirli tanktan bölmesini çıkarın ve% 70 etanol ile iki parça püskürtün. Musluk suyu ile iyice durulayın ve tank izin ve tekrar kullanmadan önce tamamen kurumasını kafasını karıştırır. Sirkülasyon sistemi filtreleri kontrol edilmeli ve bunların düzgün çalışmasını sağlamak için düzenli olarak değiştirilmesi gerekir. Bu filtreler tüm balık tankları için uygun ve temiz su temini sağlamak için düzenli olarak değiştirilmesi gerekir. 120 mikron filtre pedi genellikle yeniden yerleştirilebileceğini ya da günlük olarak değiştirilir; yenisi ile değiştirmeden önce cihazın tamamen kullanmak için su akışını doğru konumlandırmak. Kapak filtresi haftalık değiştirilmesi gerekir. Dış filtre değiştirmek için, karınca bükerek filtre ünitesi çıkarınBir anahtarı veya ellerle iclockwise. Plastik bir levha veya su dökülmesini önlemek veya absorbe için aşağıdaki havlu yerleştirin. Yenisi ile teneke kutu filtresini değiştirin ve filtre ünitesi geri sistemine sığması, dikkatle ellerini ve bir anahtar gerekirse sıkın. Karbon filtresi (her iki hafta) iki haftada bir değiştirilmelidir. Karbon filtre değiştirmek için, bir anahtar ile dikkatlice karbon filtre birimini çıkarın. Kullanılan aktif karbon atın ve yeni aktif karbon ile değiştirin. Karbon tutucu yeniden uyum ve filtre ünitesi içine geri yerleştirin. Sistem içine filtre ünitesine geri takın. Sistemi açın ve suyun filtreye akıyor kontrol edin. Eğer gerekirse, sistem içine filtre takılmadan önce boru içinde kir temizlemek için boru ile bir miktar su yıkayınız. Biyolojik filtre her altı ayda bir temizlenmesi gerekir. Bir biyolojik filtre genellikle sirkülasyon sistemi içinde teneke kutu ve karbon filtresi arasında yer almaktadır. Biyolojik filtre, rem değiştirmek içinsisteminden filtre ünitesi ove. Baskı serbest bırakma düğmesine basarak filtre basıncı serbest bırakın. Bir anahtar ile sökün filtresi. Genellikle iki kişi bu adım için gereklidir. Filtre ünitesinin kapağını çıkarın. Su siporax ayırmak için bir elek kap içine filtre içeriği boşaltılır. Not: siporax nitrifikasyon-denitrifikasyon hem gerçekleştirme yeteneğine sahip bir ince gözenekli biyo-filtre medya. Siporax çok kirli ise yeni ile değiştirin. Sistem su (de-klorlu su) ile filtre ünitesi doldurun, kapağını kapatın, sistemi ve su kaynağı anahtarına filtre ünitesi döner. Not: Bir acclimated akvaryumda, siporax birkaç nitrifikasyon bakterileri için evde olacak. Bu mikroorganizmalar, bir nitrit başak ardından, ciddi bir amonyak başak neden olabilir akvaryum içerisindeki azot döngüsünü sürdürmek ve biyolojik filtre (kirli siporax) için birincil konut kaldırılması için kritik olan ise new biyolojik filtre (yeni siporax ile) yeniden kurulması. Azot döngüsü bu ara devletlerin Hem Sudaki organizmalar için toksik olabilir ve uygun yanıt değilse zebrafish öldürebilir. Bu nedenle, bu yeni siporax bu mikroorganizmaların hızlı bir repopulation izin vermek için başka zebrabalığı muhafaza sistemi (örneğin, Sucul sistem içinde toplama tankı) içinde bir ikincil biyolojik filtre olması önemlidir. UV filtreleri sistemi biyolojik kirleticilerin (bakteriler gibi) kontrol etmek için kullanılır ve her geçen dokuz on ay değiştirilmesi gerekir. UV filtre dezenfeksiyon doz oranı ~ 110 mJ / lamba süresinin başlangıcında cm2 ve doz oranı da o yine de görünse de dünya değiştirmek için gerekli olan, dolayısıyla zamanla azalır olduğu not edilmelidir fonksiyonel. 2. Besleme Zebra balığı larvaları t için 100 mikron kuru gıda (gıda boyutu ile beslenebiliro 300 / yetişkin balık) ya da canlı yem (salamura karides) için 400 mikron. Salamura karides (Artemia sp.) Yumurta yerel evcil hayvan dükkanları mevcuttur ve aşağıda açıklanan basit adımları takip ederek laboratuvar yumurtadan olabilir. Daha iyi çözünürlük için bir manyetik karıştırıcı üzerinde tuz ile bir behere koyarak yaşlı suda kırmızı deniz tuzu eritin. Alternatif olarak, tuz havalandırma borusu ile havalandırılmasıyla su içinde çözülebilir. Kırmızı deniz tuz mevcut değilse, anlık okyanus tuz aynı zamanda bir kuluçka çözelti olarak kullanılabilir. Salamura karides tuzluluk geniş tolere edebilir, ancak biz 30-35 g / L kırmızı deniz tuzu su bizim salamura karides (10-15 g) çıkar. Not: durumda salamura karides yumurta ardından kapsüle salamura karides de karides kuluçkahane eklemeden önce gruplar halinde "Dekapaj" sonra kullanılabilir yerel evcil hayvan mağazalarında hazır değildir. Bu aynı zamanda evcil hayvan mağazası sık geziler önlemek olabilir. Sa ile salamura karides çıkım doldurunlt su ve 1.2 kaşığı / litre 'lik bir konsantrasyonda karides yumurta ilave edin. Bir hava pompası ile kuvvetlice çıkım havalandırınız ve ~ 48 saat süreyle kuluçkaya salamura karides yumurta bırakın. Not: Bu un-zenginleştirilmiş artemia besin değeri her saat sonrası kuluçkalık kaybetmek olduğu unutulmamalıdır. Bu nedenle, 24 saat boyunca ya da yumurtadan uygun olabilir veya salamura karides maksimum besin değeri elde etmek için 48 saat boyunca zenginleştirebilir. Kuluçka sistemi Atık su çamaşır suyu ile dezenfekte ve daha sonra bertaraf edilmek üzere karantinaya atık eklenir. Salamura karides toplamak için, hava borusu çıkarın ve kültür ama fazla 10 dakika 4-5 dakika yerleşmek için izin verir. Yumurtadan salamura karides Hatcher altında toplamak. Çıkım altındaki musluk kullanarak salamura karides toplayın. Un yumurtadan salamura karides yumurta oluşur ilk akış atın. <li> atarak sonra un yumurtadan salamura karides, zebrafish yiyecek olarak kullanılacak yumurtadan salamura karides toplamak. Bir tuzlu su karidesi koleksiyonu Net (~ 350 mikron naylon mesh) kullanarak, tuzlu su tuzlu karides ayırın. Sistemi su kullanarak bir kabın içine net salamura karides durulayın. Toplanan tuzlu su karides genellikle oldukça turuncu renk veren kabın altındaki yüksek bir konsantrasyonda mevcuttur. Bir pipet veya damlalık / squeezy şişe kullanarak zebrafish için salamura karides besleyin. Dağıtılan gıda miktarı bireysel tanklarının nüfusun büyüklüğüne bağlıdır. Zebrafish için yaygın kabul oranı günlük gıda vücut ağırlığının% 4 almaktır. Bu bazı balık overeating nedeniyle ölebilir gibi muhtemelen, üreme veya canlılığını etkileyen, suda nitrat seviyesini artırabilir olarak Zebrafish overfed asla. Içine gıda enjekte üzerinesu, aç balık salamura karides yakalamak için yüzebilirsiniz. Kuru besleme bir Sucul Eko-System / Sucul Habitatlar basit yaylı tabanlı balık yiyecek dağıtıcı kullanılarak yapılabilir. Alternatif olarak, kuru besleme de basit bir kaşık kullanarak gerçekleştirilen ya da bir küçük kaşık bir görünüm vermek için makas ile çapraz bir plastik damlalığı keserek edilebilir. 3. Üreme Işık başlangıcında yetiştirme başlatmak zebrafish. Döllenmiş yumurta tank içi üreme ya da ikili yetiştirme yoluyla elde edilebilir. Depo içi yetiştirme daha emek-verimli ve laboratuvarımızda düzenli embriyo toplama için uygulanan edilirken genler veya mutasyonlar, bireysel balık taranacak olduğunda, ikili ıslahı tercih edilir. Depo içi üreme için, depo içi damızlık monte ve ışık başlangıcından sonra akvaryum içine yavaşça bırakın. Alternatif olarak, tank içi ıslah kurulum akvaryum içinde gece boyunca bırakılabilir. Lsaçak yaklaşık 15 dakika depo içi damızlık balık tanktan damızlık çıkarmadan ve yumurta toplama öncesi çiftleşmek için izin vermek. İkili üreme genellikle beslenmeden sonra afternoon kurulur. Üreme tankı kurma ve yaşlı sistemi su ile doldurun. Islah tankın zıt taraflarına bir dişi biri erkek aktarın. Dişiler, çünkü onların büyük Göbek erkeği ayırt edilebilir. Onlar kadınlarda daha renkli daha ince ve koyu çünkü Erkeklerde de kadınlarda ayırt edilebilir. Ayrıca, erkekler dişilerden (bkz. Şekil 1) ile karşılaştırıldığında anal yüzgeç daha sarı renge sahip. Ne zaman kadın Zebra balığı yumurtlama borusu (bkz. Şekil 4) için şüphe görünüm. Kısa bir süre ışığın başlangıcından sonra ertesi sabah bölücü çıkarın. Embriyoların yeterli sayıda tankın altına yerleştirilir kadar, 20 dakika süre ile veya bozulmamış meydana çiftleşme izin verir. Islah sonra,onların tankları balık dönün. Bir süzgeç kullanarak yumurtaları toplayın. Sistemi su ile iyice embriyolar yıkayın. Aka EM3 (NaCl, 13.7 mM;; KCl, 0.54 mM; MgSO4, 1,0 mM; CaCl 2, 1.3 mM; Na 2 HPO 4, 0.025 mM; embriyo orta süzgeç durulama tarafından Petri kabı embriyolar transfer KH 2 PO 4, 0.044 mM; NaHCO 3, 4.2 mM). Embriyolar mikroskop altında görülebilir. Döllenmiş yumurta sonra bir iğne ile bir pipet (bakınız Şekil 3) kullanılarak döllenmemiş yumurta ayrılır. 4. Larva yetiştiriciliği Döllenen yumurtalar, kuluçka (~ 28.5 ° C) 72 saat boyunca larvalar yumurtadan kadar tutulur. Şimdi larva özgürce bir ana balık tankına aktarmak için hazır koryon ve yüzme dışında. Larva (kompozisyon açıklanan 5 gün sonrası fertilizasyon (DPF) beslenen gerekir ve embriyo ortamda tutulurBölüm 3, 10) veya sistem su. Larva suyun ~% 50 ya da daha fazla burada günlük olarak değiştirildi yuvarlak yemekleri muhafaza edilebilir. Su değişimi ölü ya da hastalıklı larva ve diğer enkaz kaldırma içermelidir. Küçük ölçekli bir siper (300-400 mikron) içeren bir tank içine yavaşça larvaları aktarın. Ölü larva ve hastalıklı kaldırılır ve çok az su mL günlük olarak yavaş yavaş ilave edilmelidir. 14 gün sonra, larvalar tank sistem içine rafa olabilir, ve bisiklet suyun küçük bir akım (saniye başına 1-2 damla) ile birlikte verilmektedir. Larvalar büyüdükçe, su akış arttırılabilir. Sürgüler farklı boyutlarda yetişkin balıklar için kullanılması gereken larvaları (örn. bölmesinin boyutu 300-400, 500, 700-750, 1000 mikron) ve normal bir plastik bölmesinin boyutuna bağlı olarak kullanılabilir. Embriyoların cinsel olgun yetişkin haline gelmesi için genellikle 3 ay sürer.