疾患の病因を研究するツールとしてのニューロンへの抗体のトランスフェクション

抗体は、生体のシステムで行われている様々なイベントに新たな洞察を得るための機能を提供します。標的タンパク質に特異性の高い抗体を産生する能力が対処しなければ、非常に正確な生物学的な質問のために許可されています。重要なのは、抗体は全身性エリテマトーデス（SLE）、関節リウマチ（RA）、腫瘍随伴症候群、多発性硬化症（MS）とヒトTリンパ球向性ウイルス1型（HTLV-1）を含むヒトの多くの疾患の病因に関与している脊髄症/熱帯性痙性対麻痺（HAM / ^TSP）1-9関連付けられています。抗体は、病気が進行中の調査の領域であり、データは抗体および炎症の様々な細胞内分子の結果の間の相互作用は、携帯メッセージング、およびアポトーシス^10を変更^していることを示唆している原因になる方法。これは、MSとHAM / TSP患者は細胞内のRNA結合タンパク質異種リボ核タンパク質に対する自己抗体を産生することが示されている^5月7日 1（のhnRNP A1）は^{3、9、11。}最近のデータは、イントラ神経および表面抗原の両方に対する抗体が病原^{3、5月9日、11}であることを示している。したがって、細胞内抗体の研究を可能にする手順：タンパク質相互作用は、疾患の病因に偉大な洞察力を貸すだろう。

遺伝子は一般的に初代培養細胞や培養細胞株にトランスフェクトされ、細胞内への抗体のトランスフェクションは、しかし抗体構造または貧弱トランスフェクション効率を¹²の改変によって妨げられている。トランスフェクションの他の方法としては、カチオン性リポソーム（DOTAP / DOPEから成る）とポリエチレンイミン（PEI）に基づく抗体のトランスフェクションを含む;コントロール¹²と比較して、抗体のトランスフェクションの10倍に減少したどちらも。私たちの研究で行った方法では、陽イオン脂質媒介方法に類似しており、静とhydrを通じて抗体と非共有結合複合体を形成するために、脂質ベースのメ​​カニズムを使用しophobic相互作用^13。我々は、非共有結合、静電性および疎水性相互作用を介して抗体を捕捉し、細胞内でそれらを提供することができる脂質製剤であるAB-DeliverIN試薬を利用した。したがって、化学的および遺伝的カップリングは生細胞に機能的な抗体の送達のためには必要ありません。この方法では、さまざまなトレース抗体やタンパク質の局在化実験と同様に、細胞内抗体の分子の結果の分析を行うことができるようになりました：タンパク質相互作用^9。

このプロトコルでは、再現性とトランスフェクション効率の高い、急速に神経細胞に抗体をトランスフェクトする方法を示します。一例として、我々はアンチのhnRNP A1および抗IgG抗体を使用します。トランスフェクション効率を簡単に定量化のために、我々はアト-550-NHSとFITC標識IgGで標識した抗のhnRNP A1抗体を使用していました。 Atto550 NHSは高分子吸収と量子yiを持つ新しいラベルですELD。励起源とAtto550用蛍光フィルターはCy3（例：556エム。578）に似ています。また、Atto550は高い光安定性を持っています。 FITC標識IgGは、このメソッドは汎用性であることを示していると依存染めないようにコントロールとして用いた。生成されたこのアプローチは、データは細胞内標的抗原に対する抗体は、ヒト疾患の病因に果たしていることが役割の理解に役立ちます。