L'épuisement et la reconstitution des macrophages chez la souris
Summary
Les macrophages jouent un rôle central dans l'homéostasie et de la pathologie dans de nombreux tissus. Le protocole présenté ici décrit des méthodes pour épuiser les macrophages<em> In vivo</em>, Dérivant macrophages polarisés de ponctions de moelle osseuse, et le transfert adoptif des macrophages à des souris. Ces techniques permettent de déterminer le rôle que les macrophages polarisés jouer dans la santé et la maladie.
Abstract
Les macrophages sont des acteurs essentiels dans la réponse immunitaire innée au défi infectieuse ou d'une blessure, les initiateurs de la réponse immunitaire innée et de diriger la réponse immunitaire acquise. Macrophage dysfonctionnement peut conduire à une incapacité de monter une réponse immunitaire appropriée et en tant que telle, a été impliqué dans de nombreux processus pathologiques, y compris les maladies inflammatoires de l'intestin. Les macrophages afficher phénotypes polarisés qui sont largement divisés en deux catégories. Macrophages activés Classiquement, activées par la stimulation avec IFNy ou LPS, jouent un rôle essentiel dans la réponse au défi alors que les macrophages bactérienne alternativement activés, activée par l'IL-4 ou d'IL-13, participer à des débris de balayage et le remodelage des tissus et ont été impliqués dans la résolution la phase de l'inflammation. Lors d'une réponse inflammatoire in vivo, les macrophages se trouvent au milieu d'un mélange complexe d'infiltrer les cellules immunitaires et peuvent participer en exacerbant ou résolvinel'inflammation g. Pour définir le rôle des macrophages in situ dans un modèle animal entier, il est nécessaire d'examiner l'effet de l'épuisement des macrophages à l'environnement complexe. Pour poser des questions sur le rôle du phénotype des macrophages in situ, phénotypiquement définis macrophages polarisés peuvent être dérivées ex vivo, à partir de ponctions de moelle osseuse et rajoutées à la souris, avec ou sans l'épuisement préalable des macrophages. Dans le protocole présenté ici clodronate liposomes contenant, par rapport aux témoins injectés PBS, ont été utilisés pour épuiser les macrophages du côlon au cours du sulfate de sodium dextran (DSS) de colite induite chez la souris. En outre, les macrophages ont été polarisées dérivée ex vivo et transféré à des souris par injection intraveineuse. Une mise en garde de cette approche est que les liposomes contenant du clodronate épuiser toutes les phagocytes professionnels, y compris les deux cellules dendritiques et les macrophages afin d'assurer l'effet observé par l'épuisement est macrophages spécifique, la reconstitution ophénotype f par transfert adoptif de macrophages est nécessaire. L'épuisement des macrophages systémique chez la souris peut également être obtenu par rétrocroisement souris sur un fond CD11b-DTR, qui est une excellente approche complémentaire. L'avantage du clodronate liposome contenant médiée par l'épuisement, c'est qu'il ne nécessite pas le temps et les frais engagés pour les souris et rétrocroisement il peut être utilisé chez la souris indépendamment de l'origine des souris (C57BL / 6, BALB / c, ou d'origine mixte ).
Protocol
Discussion
Les macrophages sont des cellules phagocytaires qui jouent un rôle important dans le système immunitaire. Ils sont responsables pour initier la réponse immunitaire innée et de diriger la réponse immunitaire acquise. En règle générale, les macrophages activés classique sont activés par IFNy ou LPS et sont responsables de l'élimination des pathogènes et le montage d'une réponse inflammatoire 1. A l'inverse, les macrophages activés alternativement sont activés par l'IL-4 ou d'I…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par une «subvention à l'aide de la recherche» de la maladie de Crohn et la colite Fondation du Canada pour LMS, qui est soutenu par une Association canadienne de gastroentérologie / Association canadienne de la Santé s de recherche / maladie de Crohn et la colite Fondation des Prix du Canada de nouveau chercheur.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Clodronate-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| PBS-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| Sterile PBS pH7.4 | Invitrogen | 14190 |
| IMDM | Invitrogen | 12440 |
| Fetal Calf Serum (FCS) | Invitrogen | 12483 |
| acetic acid | BDH Aristar | BDH3092-500MLP |
| Monothioglycerol (MTG) | Sigma | 96-275 |
| Recombinant murine MCSF | Stemcell Technologies | 02951 |
| Recombinant murine GM-CSF | Stemcell Technologies | 02935 |
| Recombinant murine IL-3 | Stemcell Technologies | 02903 |
| Recombinant murine IFNγ | Stemcell Technologies | 02746 |
| Recombinant murine IL-4 | Stemcell Technologies | 02714 |
| Cell Dissociation Buffer | Invitrogen | 13150-016 |
| Rat anti-F4/80 Antibody | AbD Serotec | MCA497GA |
| Mouse anti-ArgI Antibody | BD Transduction Laboratories | 610708 |
Table 1. Specific reagents used in this protocol.
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