Summary

집중 Waterborne 바이러스와 농업 Zoonotic 병원균에 대한 유리 양모 필터

Published: March 03, 2012
doi:

Summary

유리 양모 필터는 전세계 연구 그룹의 숫자 waterborne 바이러스를 집중하는 데 사용되었습니다. 여기 글라스울 필터를 구축하기위한 간단한 접근 방식을 보여 주며 필터도 waterborne 바이러스성, 세균성 및 protozoan 병원균을 집중 효과입니다 보여줍니다.

Abstract

의심 오염된 물에 병원체 수준을 평가의 중요한 첫 번째 단계는 농도입니다. 농도 방법은 예를 들어, 샘플링 프로그램이 하나 이상의 병원체 그룹을 대상으로하는 경우 여러 가지 방법이 필요합니다 의미한다 Giardia와 Cryptosporidium 1에 대한 미국 환경 보호청 방법 1623 특정 병원체 그룹에 대한 구체적인 경향이 있습니다. 현재 방법의 또 다른 단점은 장비 예를 들어, 바이러스에게 2 집중에 대한 1MDS 카트리지 필터 VIRADEL 방법 복잡하고 비쌀 수있다. 이 문서에서는 waterborne 병원균을 집중을위한 글라스 울 필터를 구성하는 방법에 대해 설명합니다. 필터는 용출 후 원액은 문화적 또는 분자 방법에 의해 병원균 감지 및 열거 다음과 같은 원심 분리와 같은 두 번째 농도 단계, 의무가있다. 필터는 몇 가지 장점이 있습니다. 건설 간단하고 필터를 만들 수 있습니다특정 샘플링 요구 사항을 충족을위한 NY 크기. 필터 부분은 가능한 심하게 프로젝트 예산에 영향을주지 않고 샘플의 다수를 수집하고, 저렴합니다. 대형 샘플 볼륨 (100s 1,000의 패)은 샘플 탁도에서 막힘의 비율에 따라 집중하실 수 있습니다. 필터는 매우 휴대용이며, 펌프 및 유량계 등 최소한의 장비로, 그들은 완성된 식수, 표면 물, 지하수 및 농업 결선을 샘플링을 위해 현장에서 구현할 수 있습니다. 마지막으로, 글라스 울 여과은 하나의 방법이 필요하므로 병원체 종류의 다양한 집중을위한 효과적입니다. 여기 waterborne 인간 enterovirus, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum 및 조류 독감 바이러스를 자세하게 필터 효과에 대한 리포트입니다.

Protocol

1. 글라스 울 준비 필터의 각 일괄 처리 전에시키고 이후 10 %의 표백제 용액으로 작업 영역을 소독. 장갑과 가운 입어. 최소한 20 분 동안 121 ° C와 15 PSI에 autoclaving하여 양동이를 소독. 멸균 양동이에 유리 양모를 놓습니다. 역삼투 물로 글라스 울을 포화 및 15 분 동안 흠뻑 젖어 보자. 양동이에서 역삼투 물을 배수. 1 M HCL로 글라스 울을 포화 및 15 분 동안 흠뻑 …

Discussion

유리 양모 필터와 같은 완료 식수 7 지하수 8,9, 표면 물 10, 바다 물 11, 폐수 12 등 물의 다양한 소스에서 인간 장용 바이러스를 집중 여러 연구 팀으로 3,5,6에서 사용하고있다 농업 결선 13. 여기 필터는 또한 조류 인플루엔자 바이러스뿐 아니라 세균 및 병원체 protozoan 각각 살모넬라 enterica (serovar Typhimurium)와 Cryptosporidium parvum을

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

우리는 비디오를 해설을 위해 윌리엄 T. Eckert 감사드립니다. 글라스 울 프로토콜의 개발은 미국 EPA는 스타 그랜트 R831630로부터 자금 장용 위험 (WAHTER 연구)에 대한 위스콘신 물과 건강 평가판의 일부였다. 알래스카 샘플은 US 지질로부터 재정 지원으로 A. 리브스, A. Ramey,와 B Meixell이 수집되었다. 무역, 제품 또는 회사 이름의 사용을 설명용으로만 사용되며 미국 정부에 의한 승인을 의미하지는 않습니다.

Materials

Name of reagent or item Company Catalogue number
Hydrochloric acid Fisher Scientific A144-500
Sodium hydroxide Fisher Scientific BP359-212
Phosphate Buffered Saline
Sodium chloride
Potassium phosphate-dibasic
Potassium phosphate-monobasic

Fisher Scientific
Fisher Scientific
Fisher Scientific

BP358-212
BP363-500
BP362-500
Sodium hypochlorite i.e., household bleach The Clorox Co.  
Sodium thiosulfate, anhydrous Fisher Scientific S 475-212
Beef extract, desiccated Becton, Dickinson and Company 211520
Glycine Fisher Scientific G46-500
Oiled sodocalcic glass wool
Or
R-11 unfaced fiberglass insulation
Isover

Johns Manville
Bourre 725 QN


Polypropylene mesh Industrial Netting xN4510
2″x4″ Sch 80 PVC threaded pipe nipple Grainger 6MW35
2″ Sch 40 PVC cap Grainger 5WDW3
Male adapter nylon fitting (1/2″x1/2″) US Plastic Corp. 62178
Sample bottles for eluate- 1 liter Fisher Scientific 03-313-4F
60 mL syringe Fisher Scientific NC9661991
pH strips Whatman 2614 991
Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm McMaster-Carr 4411K75
Prefilter housing Cole-Parmer S-29820-10

References

  1. US Environmental Protection Agency. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA. EPA 815-R-05-002. , (2012).
  2. Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge filters for concentrating viruses from tap and river water. J. Virol. Methods. 132, 13-17 (2006).
  3. Lambertini, E. Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters. Appl. Environ. Microbiol. 74, 2990-2996 (2008).
  4. Spackman, E. Development of a real-time reverse transcription PCR assay for Type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes. J. Clin. Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).
  5. Environment Agency. Optimisation of a new method for detection of viruses in groundwater. Report No. NC/99/40. , (2000).
  6. Vilaginés, P., Sarrette, B., Husson, G., Vilaginés, R. Glass wool for virus concentration at ambient water pH level. Water Sci. Technol. 27, 299-306 (1993).
  7. Vivier, J. C., Ehlers, M. M., Grabow, W. O. Detection of enteroviruses in treated drinking water. Water Res. 38, 2699-2705 (2004).
  8. Powell, K. L., Sililo, O. . Enteric virus detection in groundwater using a glass wool trap. In: Groundwater: Past Achievements and Future Challenges. , 813-816 (2000).
  9. Hunt, R. J., Borchardt, M. A., Richards, K. D., Spencer, S. K. Assessment of sewer source contamination of drinking water wells using tracers and human enteric viruses. Environ. Sci. Technol. 44, 7956-7963 (2010).
  10. van Heerden, J., Ehlers, M. M., Heim, A., Grabow, W. O. Prevalence, quantification and typing of adenoviruses detected in river and treated drinking water in South Africa. J. Appl. Microbiol. 99, 234-242 (2005).
  11. Vilaginés, P. Round robin investigation of glass wool method for poliovirus recovery from drinking water and sea water. Water Sci. Technol. 35, 445-449 (1997).
  12. Gantzer, C., Senouci, S., Maul, A., Levi, Y., Schwartzbrod, L. Enterovirus genomes in wastewater: concentration on glass wool and glass powder and detection by RT-PCR. J. Virol. Methods. 65, 265-271 (1997).
  13. Borchardt, M. A., Jokela, W. E., Spencer, S. K. Pathogen losses in surface water runoff from dairy manure applied to corn fields. , (2011).
  14. Deboosere, N. Development and validation of a concentration method for the detection of influenza A viruses from large volumes of surface water. Appl. Environ. Microbiol. 77, 3802-3808 (2011).
  15. Lambertini, E. Virus contamination from operation and maintenance practices in small drinking water distribution systems. J. Water Health. 9, 799-812 (2011).

Play Video

Citer Cet Article
Millen, H. T., Gonnering, J. C., Berg, R. K., Spencer, S. K., Jokela, W. E., Pearce, J. M., Borchardt, J. S., Borchardt, M. A. Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens. J. Vis. Exp. (61), e3930, doi:10.3791/3930 (2012).

View Video