Speichel, Speicheldrüse, und Hämolymphe Abholung Ixodes scapularis Zecken
Summary
Die Sammlung von infizierten Zecke Hämolymphe, Speicheldrüsen, und Speichel ist wichtig, zu untersuchen, wie durch Zecken übertragene Erreger eine Krankheit verursachen. In diesem Protokoll haben wir demonstrieren, wie man Hämolymphe und Speicheldrüsen von der Fütterung sammeln<em> Ixodes scapularis</em> Nymphen. Wir zeigen auch, Speichel Sammlung von weiblichen<em> I. scapularis</em> Erwachsene.
Abstract
Zecken sind weltweit und plagen die Menschen mit vielen Zecken-übertragene Erkrankungen. Zecken sind Vektoren für Krankheitserreger, die Lyme-Borreliose und Frühsommer-Rückfallfieber (Borrelia spp.), Rocky Mountain Spotted Fever (Rickettsia rickettsii), Ehrlichiose (Ehrlichia chaffeensis und E. equi), Anaplasmose (Anaplasma phagocytophilum), Enzephalitis (tick-verursachen Meningo-Enzephalitis-Virus), Babesiose (Babesia spp.), Colorado Zeckenbissen (Coltivirus) und Tularämie (Francisella tularensis) 1-8. Um richtig in den Wirt übertragen werden diese Erreger unterschiedlich die Genexpression regulieren, interagieren mit Zecken-Proteine und wandern durch die Zecke 3,9-13. Zum Beispiel, passt sich die Lyme-Borreliose-Agent, Borrelia burgdorferi, durch differentiellen Genexpression zu dem Fest und Hungersnot Stadien der Zecke enzootischen Zyklus 14,15. Darüber hinaus verbraucht als ein Ixodes Zecken einBlutmehl Borrelia replizieren und wandern aus dem Mitteldarm in die Haemocoel, wohin sie wandern in die Speicheldrüsen und werden in den Wirt mit dem Speichel vertrieben 9,16-19 übertragen.
Wie eine Zecke führt der Host antwortet in der Regel mit einer starken hämostatischen und angeborene Immunantwort 11,13,20-22. Trotz dieser Wirtsreaktionen, I. scapularis kann für mehrere Tage zu ernähren, da Zecken Speichel enthält Proteine, die immunmodulatorische sind, lytische Mittel, Antikoagulanzien und fibrinolysins, die Zecke 3,11,20,21,23 Fütterung zu helfen. Die immunmodulatorischen Aktivitäten von Zeckenspeichel oder Speicheldrüsen-Extrakt (SGE) besessen zu erleichtern Übertragung, Vermehrung und Verbreitung von zahlreichen Zecken übertragenen Krankheitserregern 3,20,24-27. Um weiter zu verstehen, wie durch Zecken übertragene Erreger eine Krankheit verursachen es wichtig, aktiv zu sezieren Fütterung Zecken und sammeln Zeckenspeichel ist. Dieses Video demonstriert Protokoll Dissektion Techniken fürdie Sammlung von Hämolymphe und die Entfernung der Speicheldrüsen von der aktiven Zuführen I. scapularis Nymphen nach 48 und 72 Stunden nach der Platzierung der Maus. Wir zeigen auch, Speichel Kollektion von einer erwachsenen Frau I. scapularis tick.
Protocol
Discussion
Die Sammlung von Zecken Hämolymphe, Speicheldrüsen, und Speichel ist in der Studie von Zecken übertragene Erreger Übertragung wichtig, Prävalenz, Verbreitung, Vermehrung und Persistenz sowohl in der Zecke und dem Host 6,11-13,20,23,29. Es gibt mehrere Möglichkeiten, um ein Häkchen 30,31 sezieren. Allerdings, wenn das Sammeln Speicheldrüsen ist es wichtig, die Zecke richtig, so dass die Speicheldrüsen nicht gebrochen oder verloren in der Zecke die Überreste zu sezieren. Sobald die Speichel…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren möchten sich bei der Aufteilung des Vector-Borne Diseases Animal Resources Abteilung bedanken, speziell Andrea Peterson, Lisa Massoudi, Verna O'Brien, John Liddell und für ihre Pflege und Wartung der Mäuse und Kaninchen. Wir möchten auch an Amy Ullmann, Theresa Russell, und Barbara J. Johnson für ihre Beiträge zu diesem Manuskript danken. Schließlich möchten wir Alissa Eckert in das Amt des Associate Director für Kommunikation an der CDC anerkennen für die Herstellung der grafischen Darstellungen und Judy Lavelle zum Lenken alle Gesetzmäßigkeiten mit den Dreharbeiten zu dieser Handschrift verbunden.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue Number |
| Hydrogen peroxide | Fisher | H312-500 |
| Ethanol | Acros | 61509-5000 |
| PBS | Boston Bioproducts | BM-2205 |
| Dumont Fine forceps (3C) | Fisher | NC9906085 |
| Silane treated microscope slides | Bioworld | 42763007-1 |
| Pap pen | Bioworld | 21750008-1 |
| Super frost plus microscope slides | Fisher | 12-550-18 |
| Pilocarpine | Sigma | P6503-5G |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma | P2714 |
| #11 disposable scalpel | Feather | 2975#11 |
| Nontoxic modeling clay | Fisher | S17307 |
| Capillary tubes | Chase scientific Glass, inc | 40A502 |
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