末席ž微型自动细胞计数器是一种新型的仪器,结合专利的薄膜传感器技术和专有软件算法进行上浆和一个广泛的尺寸范围的颗粒计数以及确定的单分散的整体健康库尔特原理哺乳动物细胞培养。该协议,介绍了该仪器的使用计数和评估健康的细胞培养。
用于各种应用,包括常规的细胞培养,血液分析,工业控制1-5粒子和细胞计数。细胞/颗粒计数技术的一个重要突破是的科尔特技术的发展华莱士科尔特超过50年前。该技术涉及电场跨微米大小的孔径的应用和流体力学重点是通过光圈的单粒子。颗粒闭塞的光圈导致产生可测量的变化中可以直接,准确地与细胞尺寸/体积的电阻抗。识别的方法在细胞/颗粒计数基准源于非凡的精度,其颗粒大小和计数的准确性,特别是相比,手册和成像技术(98%与75库尔特计数器精度 – 手册和基于视觉系统的80%)。这可以归结为事实,库尔特技术使成像为基础的细胞计数的方法不同,计算精确的容量信息,一个真正的立体(三维)细胞/颗粒测量极大地减少了计数的干扰,从碎片和聚类有关的细胞/颗粒。总体而言,这提供了一个列举和大小细胞在更准确,更繁琐,耗时少,少主观手段比其他计算技术6。
尽管库尔特细胞计数技术突出,在例行的生物学研究已经广泛使用的成本和规模的传统乐器由于望而却步。虽然更便宜的的库尔特基于仪器已制作完成,它具有比其更昂贵的同行在校正“巧合事件”在两个或两个以上的细胞通过光圈和同时测量的局限性。 AnotheR与现有的库尔特技术的限制是缺乏对整体健康的细胞样本的指标。因此,必须经常被用于其他技术结合库尔特计数来评估细胞活力。这延伸自可行性评估的传统方法需要细胞染色和/或使用昂贵而笨重的设备,如流式细胞仪实验的设置时间和成本。
末席ž迷你自动细胞计数器,这里描述的,是一种超小型台式仪器,用薄膜传感器技术相结合的库尔特原理的准确性,使精确的范围从3-25微米的颗粒大小和计数,这取决于用细胞计数卡带。 M型盒式可以用来计数颗粒平均直径4 – 25微米(动态范围2 – 34微米),S型的卡带可以用来计算与粒子和平均直径为3 – 20微米(动态响E 2 – 26微米)。由于该系统采用了体积的测量方法,在4-25微米,相当于34个细胞体积范围 – 8,180 FL和3 – 20微米,相当于14细胞体积范围 – 4200 FL,这是有关非球面粒子被测量。使用末席ž执行哺乳动物细胞计数,计算细胞稀释与ORFLO或类似的稀释剂。一个细胞计数磁带插入仪器,样品装载到磁带端口。成千上万的细胞被拉到一个“细胞传感区”(财税字),单文件,在8-15秒薄膜膜。运行之后,仪器的使用与专有软件算法的专有随着整体文化的健康评估,确定利益的人口数量的细胞总数的比例提供巧合事件校正曲线拟合粒子。含总粒子计数é萎缩,打破死细胞,以及其他碎片和污染物。结果是在直方图的格式,可以根据需要手动调整的大门,自动曲线拟合。
最终,没戏ž使计数到库尔特Z2的,目前的黄金标准相比具有精度和准确性,同时提供更多的文化健康信息。此外,它在更短的时间内实现这些结果,与更小的体积,显着更容易操作和维护,并在一小部分的成本可比技术。
底层实现库尔特方法可以是高度确定性的整体测量精度。一个重要领域是“巧合事件”在两个或两个以上的细胞,同时通过光圈和电气作为一个单一的事件测量的原始细胞计数校正。 “巧合事件”作出贡献的错误而异,取决于许多因素,包括细胞的大小和集群程度(Davis等,1967)6。因此,对于任何给定的样本所需的巧合校正不能预测,广泛应用于细胞/颗粒类型之间,甚至相同的细胞类型的不同文化之间的不同。建立理论,扎根在最初的出版物由库尔特,涉及申请数调整的基础上,观察到的事件和经验确定的,粒子的特定的修正系数,Z的原始计数。虽然准确的计数,可以实现与T他的校正算法,它被限制在它的实用性,由于细胞类型和相应的困难,准确地预测其价值之间的z值大的变化。在这里,使用的“真实”的细胞计数没戏Z的巧合校正算法结合曲线拟合确定,没戏ž动态纠正巧合,以实现真正的浓度。当使用高端库尔特Z2的得到的结果相比,没戏ž可比计数跨越浓度范围为0 – 50万细胞/毫升(M型磁带)和3000 – 2 2.5E 6细胞/ ml(S型盒式) 。此外,没戏ž类似计数的变异系数低,是金标准,库尔特细胞计数技术的特点和颗粒尺寸精度达到这个计数的准确性。
此外,这里给出的数据表明,在末席Z可以提供有价值的信息关于细胞培养的整体健康。末席ž利用曲线拟合的方法,与专有软件算法,以确定这种文化的健康评估。与细胞死亡相关的形态学变化,如出泡,分裂,体积扭曲(冈和Tsuruo的1996,Liegler等1995年,谢里登等人,1981年)12-14,有可能使末席-Z的之 间区分impedimetric差异居住人口和死细胞/碎片群。 MVI的是所产生的文化/粒度分布分析,以确定粒子碎片的相对贡献,坏死细胞萎缩,曲线拟合感兴趣的细胞群。 MVI的价值,从而反映了人口指数的整体粒子的人口方面的单分散的人口数或比例的措施。然后这个值是基于算法调整人口统计数字和经验性观测。 becaus电子MVI的参数比传统的染色方法,它不预期,以反映这些技术,而是提供了一个健康的细胞培养成有价值的另一种观点,特别是碎片和微生物污染方面,。
总之,没戏-Z的细胞计数器是一个超小型台式仪器,提供准确,重复性检测细胞计数,细胞大小,细胞的健康使用拥有专利的薄膜传感器技术相结合的库尔特原理和曲线拟合软件算法。随着M型盒,它是能够计数的粒子,包括从4 – 8秒 – 25微米(直径34微米的动态范围,2)。与S型纸盒计数从3不等的颗粒的能力 – 在15秒 – 20微米(直径26微米的动态范围2)。此外,没戏-Z的健康评估,没有使用的试剂。这少得多的劳动集成nsive和主观比手工计数。在标准的库尔特计数相比,磨溪速度较快,明显较小,提供更多的信息,需要相当少的维护,更容易使用,是一小部分的成本。
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
ORFLO Diluent | ORFLO | MXA006 | |
Cassette Dispenser | ORFLO | Stores up to 25 cassettes for convenient dispensing | |
USB Cable | ORFLO | Connects instrument to PC/Mac or power adapter | |
Power Adapter (US and EU models only) | ORFLO | Connects USB cable to an AC outlet | |
USB Flash Drive | ORFLO | Stores Moxi Z software and user manual | |
Calibration Check Beads | ORFLO | ||
Electronic Calibration Cassette | ORFLO | Electronic cassette for verifying proper system operation and calibration |