Bir Fare Modelinde İntravenöz Öz Yönetim Yöntemleri

1. Hayvan Konut ve Alışma Prosedürleri Erkek ve dişi CD-1 fare su şişeleri ve gıda karşılamak için tel ızgara kapaklı beta çipine yatak ve nestlet yastıkları, içeren standart plastik kafeslerde eşcinsel littermates, kafes başına en fazla 5 hayvan ile yerleştirilmiştir. Standart fare yemi ve su deney boyunca ev kafeslerine mevcut ad libitum bulunmaktadır. Fare bir ters ışık-karanlık zamanlama (22:00 10:00 'ışıkları) tutulur. Fare deneysel prosedür başlamadan önce bir hafta boyunca IVSA test odaları iklime alıştırmak için izin verilir. 2. Edimsel Eğitim Şekerli süt eğitim ve intravenöz ilaç öz-yönetim oturumu dahil tüm davranışçı tedaviler 2 ultra-hassas fare kolları, diper bardak, uyarıcı ışıklar ve mikrolitre şırınga pompaları (Med Association ile donatılmış 15,9 x 14 x 12,7 cm, ölçüm edimsel odaları kullanılarak yapılmaktadırates Inc, St Albans, VT, ABD). Chambers donatı planı programlamak ve veri toplamak için Med Associates Akıllı CR arayüzü ve Med-PC yazılımı kullanılarak bir bilgisayara bağlanabilirler. Naïve fareler edimsel odalarına alışan ve diper fincan sunulan bir şekerli süt ödül (0,1 ml) kullanarak kolu basın için eğitilmiştir. Operant süt eğitim 5-7 gün boyunca 1 saatlik seans yapılır. Etkin kolu üzerinde sabit bir oranı (FR) programının tamamlanması dipper fincan ve bir uyarıcı ışık aydınlatma tanıtımı sonuçlandı. Şekerli süt çözeltisi sütler (3,25% yağ içeriği) eklenen sakaroz (10 mg / ml, ACS Reaktif, Sigma-Aldrich Inc St-Louis MO, USA) oluşuyordu. Şekerli bir çözelti süt ya da bir sıvı besin güçlendiricidir ile operant eğitim operant fareler 1,2 yanıt kolaylaştırmak için kullanılan yaygın bir tekniktir. 3. Cerrahi Sırasında Kullanılacak Ekipman hazırlanması RequIRED ekipmanları – 20, 23 ve 26 gauge iğne, taşlama, 1 cc şırınga, Tygon tüp, havya, heparin, antibiyotikler ve analjezik. 20 gauge iğne aşağı tıraş tarafından juguler vene kateter yerleştirilmesi yönlendirecek bir iğne hazırlayın. Iğne mili vene kateter tüp rehberlik iğne içinde bir kanal oluşturmak için bir değirmeni kullanarak aşağı traş edilir. İğne kanalı dikkatle tevdi edilmiş herhangi bir metal artıkları kontrol edilmelidir. Kanal için herhangi bir engel ince uçlu forseps kullanılarak kazınıp atılmalı. Yıkama ve kateter kontrol edilmesi için kullanılmak üzere iki adet 1 cc şırınga uyarlamak. Tygon boru 12 cm parça alarak ve 1 cc şırınga yapıştırılmış 26 gauge iğne ile bir ucunda onları takın ve 23 gauge iğne üzerinde hortumun diğer uçları germe tarafından iki şırınga hazırlayın. Bir şırınga bir heparinize tikarsilin çözeltisi (tikarsilin 33 mg ile% 0.9 steril tuzlu su ve diğer doldurulmalıdırve steril salin 10 ml heparin başına 0.3 mg). Kateter kanül kapaklar hazırlayın. Tygon tüp bir 23 gauge iğne gerilir ve konik 1 cm kesilir. Kalın bir mühür oluşturmak için boru parçasının açık olan ucundan eritin. Hortum tüm kanül kapak kanül ucuna sıkıca kapalı ucu geçme ile, kateter kanül üzerine uyacak şekilde yeterince uzun olacak şekilde eritilir olmalıdır. Kapağı çok uzun ise, o vidalı kateter kapsar bağlama işlemi sırasında eğildi ve sonradan delinmiş olacak bir risk olduğunu unutmayın. Böylece kateter kapaklar dikkatli bir hazırlık kanül ile iyi bir uyum sağlamak için, tavsiye edilmektedir. Gerekli çözümleri hazırlayın. Tüm reaktifler Sigma-Aldrich Inc (St-Louis MO, ABD) satın alınır. Kateter yıkama için Heparinize tikarsilin çözüm – 0.33 g tikarsilin (disodyum tuzu) ve steril serum fizyolojik 10 ml heparin 0.003 gr çözülür. Çözeltisi 0.03 mL thr temizlendiGünlük ough kateter. Antibiyotik çözüm geliştirme kan pıhtıları ve enfeksiyonları önlemek için uygulanır. Deri altı enjeksiyon için Amikicin (antibiyotik) – A tek bir subkutan enjeksiyon, 10 mg / post-operatif enfeksiyonları önlemek için kg 'lik bir dozda ameliyatı takiben verilir. Deri altı enjeksiyon için ketoprofen (analjezik) – A tek bir subkutan enjeksiyon 5 mg / herhangi ameliyat sonrası ağrı yönetimi kg 'lik bir dozda ameliyatı takiben verilir. 4. Kateter İmplantasyon Cerrahi Gerekli ekipman ve reaktifler: İzofluran, steril salin, alkol (% 70), 1 ve 3 cc şırınga steril salin, 1-cc adapte şırıngalar, Yukarıdaki bölümde 3, fare kateterler (CamCaths, Cambridgeshire, UK hazırlanan antibiyotik ve analjezik çözümleri ile dolu ), kateter kapakları (HRS Bilimsel, Montreal, Quebec kristal kapaklar), göz yağlayıcı, (bu damar yükseltmesine 4 cm plastik çubukplastik bir Q-ucu), polysporin, steril pamuklu çubuklar ve gazlı bez, kavisli ve düz forseps, arter kelepçeler, ince makas inşa edilebilir. Standart aseptik teknikler cerrahi tezgah, cerrahi aletler ve kateterlerin kullanılması ameliyat öncesinde sterilize edilir. Uygun sterilizasyon teknikleri CamCaths satın cerrahi aletler ve kateterler için otoklav buhar içerir. Cam boncuk sterilizasyon ayrıca cerrahi aletlerin uçları kullanılabilir. Etilen oksit sterilizasyon riski erime olduğunu daha hassas kateterler veya malzemeler üzerinde istihdam edilebilir. Kemirgen cerrahi aseptik teknikler daha ayrıntılı bir açıklaması ilişikteki referanslar 1,2 bulunabilir. Tezgah kurma, cihazlar ve bakım anestezi için burun konisi fotoğrafı gösterilmiştir. Fare izofluran gaz anestezisi, ve bir atma sistemi altında bir solunum tüpü kullanılarak anestezi altında yapılmaktadır. Göz yağlayıcı (Tears Naturale PM) işlem sırasında kurumasını önlemek için her iki göze uygulanır. Uygun cerrahi sınır hayvanın sırtına ve boynuna traş edilir. Herhangi kesiler yapılır önce, cerrahi alanları steril örtüler kullanarak sınırlıdır. Kalbin sağ atriyum içine yerleştirilmesi için kateter hazırlamak için, fazlalık kateter tüp, kateter bir ampul itibaren 1,2 cm kesilir. Bu yetişkin CD-1 farelerde, yaş yaklaşık 8 hafta, 20-25 gram vücut ağırlığı için kurulan uygun uzunluğudur. Kateter tüp uzunluğu fare suşu, büyüklüğü ve yaşına göre, (deneme ve yanılma ile) hafifçe ayarlanması gerekebilir. Yerleştirilmeden önce, steril tuzlu su içeren şırınga (bölüm 3.2) kateter kanül takılır ve kateter temizlendi ve kaçakları kontrol. TutmakBu şırınganın cerrahi prosedür boyunca kateter bağlı. Bu kateter yıkayın ve adım 4.7 kan geri çekmek için kullanılacaktır. 2 cm uzunluğunda midscapular kesi arka ortasında başlayan ve kateter tabanına karşılamak amacıyla ensenin hemen altında biten yapılmış,% 70 alkol ile sterilizasyon olduğunu ardından. Bağ dokusu, deri altı kateter tabanı için yer açmak için forseps ile ayrı zorunlu olmalıdır. Alanı% 70 alkol ile temizlenmesi sonra 2 cm çapraz kesi, hayvanların çene yukarı doğru gidiyor, sağ klavikulanın yapılır – ikinci bir sığ 1, sırtında hayvan yerleştirme. Juguler ven boyun deri altında yüzeysel bulunacaktır. Kateter hazırlıklarında, kateter tabanından boru arka kesiden çekilir ve sadece sağ omuz üzerinden deri altına tüp geçirerek yakın şahdamarından getirdi. Kateter tüpünün sonudursonra bir arter kelepçe takılı ve onu yerde tutmak için hayvanın yan yerleştirildi. Sağ juguler ven hafifçe hayvanın boynuna kesiden yüzeysel bağ ve yağ dokusu uzaklaşıyor tarafından bulunur. Ven çevresinde bağ dokusu kavisli bir forseps kullanarak ayrı kırık ve ven daha sonra steril bir plastik çubuk kullanarak yükselir. Gevşek açık sütür venin her iki ucu etrafında yapılır ve kateter tüp tepe püskülü aracılığıyla dişli ve sağ omuz üzerinden çözülür dinlenmek için dikiş ipliğinin üzerinde döngü gerçekleştirilir. Önce ekleme için, ıslak sürtünmeyi azaltmak için steril serum fizyolojik ile 20 gauge ekleme iğne ve ven hem de. İğne damarına paralel olarak düzenlenen ve yükseltilmiş ven (Not: iğne ucu yaklaşık 0,5 cm ven girmesi gerekir) altına yakın yavaşça eklenir. Forseps kullanarak, ven içine iğne mili aşağı kateter tüp kaydırın. Direnç bu boru i işaret ederbağ dokusu içinde değil ven içinde s. Hiçbir sızıntı olmadığından emin olmak için damar yoluyla tuzlu 0.03 cc itin. Kaçaklar ven deldi veya kateter tüp yerleştirme ayarlanması gerektiğini olabileceğini işaret eder. Not: Hortumun ven içinde olup olmadığını kontrol etmek için, ekteki salin şırınga kullanarak bazı kan çekmeyi deneyecek. Kan hemen çizilebilir yapamıyorsanız, ven veya kalp duvarının kateterin ucu tıkanıklığını gidermeye olabilir veya ven deldi olmamıştır; tüp ayarlayın ve tekrar deneyin. Kan hala çizilmiş olamaz eğer İğne reinsertion gerekli olabilir. Yerinde kateter sabitlemek için, ekleme noktası için kateter ampul itmek ve iğne çıkarılır. Alt düğüm ve daha sonra ampul Yukarıdaki ikinci düğüm sağ ipe önce bar karşı kateter sifonu çekerim. Kan çizilebilir görmek ve gerekirse biraz eğer knot gevşetmek için tekrar sınayın. Deri ve dikiş altında kateter tüp sıkıştırınhayvanın boynuna ventral kesi. Steril pamuk uçlu bir aplikatör veya tercihen kapalı kesi bazı analjezik içeren diğer antibiyotikli merhem kullanarak Hızlı Heal Polysporin uygulayın. Onun karın hayvan ile hazırlanan kesi içinde arka deri altında kateter tabanı yerleştirin. Aşırı boru minimal ilmekledi ve iyi çiğneme ve piercing hayvanın şansını en aza indirmek için kateter tabanı altında gizli olduğundan emin olun. Kateter baz her iki kesik dikiş, ve steril bir pamuk uçlu bir aplikatör kullanılarak Polysporin Heal hızlı uygulanır. Yapıştırılmış boru (bölüm 3.2) ile şırınga kullanarak heparinize tikarsilin çözüm 0,03 cc ile kateter yıkayın. Beyaz kateter kapağı üzerindeki plastik kanül kapağı ve vida ile kanül kapak takın. Kanül şapkalı önce ameliyat taze bazı farelerde kan kateter dışarı sızabilir. Bu re-floş hayvan ve rapidl önemlidirKan akmaya şansı bulamadan y kanülün kapağını değiştirin. Hayvanlar kateter açıklığını korumak için günlük olarak yıkanması gerekir. % 70 etanol ile hayvanlara arka bacakları arasından enjeksiyon alan aşağı silme sonra, deri altından bir tarafında 5 mg / kg 'lık bir dozda enjekte analjezik ketoprofen, ve diğer yan üzerinde 10 mg / kg' lik bir dozda antibiyotik amikicin. Anestezi kesilir sonra, hayvanlar 5 ila 7 gün boyunca yiyecek ve su kolay erişim ile temiz bir kafes içinde kurtarmak için izin verilir. Fare post-operatif hipotermi önlemek için bir gecede bir ısıtmalı kabin konulmalıdır. 5. Davranışsal test – Öz-Yönetim İntravenöz Davranış testi kateterler öncesinde% 0.9 steril serum fizyolojik ile temizlendi. Fare ardından yerleştirmek edilird operant odalarında ve infüzyon hattı ve infüzyon pompası bağlanır. Aktif Kolu pres uyarıcı ışık aydınlatması ile birleştiğinde bir 3.2 sn 18 ul ilaç infüzyonu ile sonuçlanabilir. Her kolu basın uyarıcı ışığı açık kalır dönem sırasında üzerinden 8 sn süre ile takip edilir. Edimsel oturumun ardından, farelerin kateterler evlerine kafes iade edilmeden önce heparinli tikarsilin çözeltisi ile temizlendi. Fareler her dozda 3 ardışık 2-hr oturumları için kendini yönetmek için izin verilir. Aşağıdaki bölümde gösterildiği gibi Dozlar her fare için rastgele sırayla sunuldu. Kateter açıklığı tuzlu ve antibiyotik solüsyon hem kateter ile yıkanabilir sağlayarak günlük değerlendirilir. Ekli referans 5 içinde tarif edildiği gibi Buna ek olarak, midazolam / ketamin deney yapılır. Kısaca, bu tür 0,02-0,03 ml ketamin (15 mg / ml) bir infüzyon 5 saniye içinde hareketsizlik gibi anestezi belirtileriveya midazolam (0.75 mg / ml) midazolam patent kateter 5 kanıtıdır.