측면 흐름 기술을 사용하여 Haematological 강한 악의 환자에서 침윤성 폐 아스 페르 길 루스 증의 탐지
Summary
침입 폐 아스 페르 길 루스 증에 대한 신속하고 정확한 포인트의 케어 테스트는 제공됩니다. 그것에 바인딩 특정 단클론 항체를 사용하여 수평 흐름 기술을 활용<em> Aspergillus</em> 항원이 폐의 감염 동안 분비. 검정은 혈청 및 brochoalveolar 세척과 호환되며 질병 진단을위한 소설 부가 시험을 나타냅니다.
Abstract
침윤성 폐 아스 페르 길 루스 증 (IPA)는 병적 상태와 haematological 강한 악의 환자와 조혈 줄기 세포 이식받는 1 사망률의 주요 원인이다. IPA가 탐지되면 무서운 진단 도전을 상징하고, '황금 표준'의 부재에서, 임상 데이터 및 미생물학과 조직 병리학 가능의 조합에 의존하고 있습니다. IPA의 진단은 연구 및 치료 암과, "검증된" "가능성"과 "가능성"침략 곰팡이 질환 2를 정의 알레르기 및 전염병의 균류학 연구 그룹 (EORTC / MSG) 합의의 국립 연구소를위한 유럽 조직을 따라야합니다 . 현재까지는 핵산 기반 검사가 외부 IPA 감지하고 그래서 중합 효소 사슬 반응 (PCR)에 대해 검증되지 않은 현재의 EORTC / MSG 진단 기준에 포함되지 않습니다.
histological 섹션 Aspergillus의 식별로 인해 시미의 문제가다른 침투성 곰팡이 병원균 3, 검증된 식별과 hyphal morphologies의 larities는 순수 문화의 etiologic 요원의 절연이 필요합니다. 문화 기반의 접근 방법은 생검 샘플의 가용성에 의존하지만, 이들은 항상 아픈 환자에 액세스할 수 있으며, 획득한 때 항상 문화 가능한 propagules를 얻을 수 없습니다.
Aspergillus의 pathogenesis에 중요한 기능은 angio-침공, 혈청 및 bronchoalveolar 세척 (BAL) 유체의 특성 antigenic 서명 분자를 탐지 검사를 사용 immunologically 균류를 추적할 수있는 기회를 제공하는 특성입니다. 이것은 Aspergillus galactomannan 및 보존 곰팡이 세포 벽 구성 요소를 감지 (1 → 3)-β-D- '범 – 곰팡이'분석을 (Fungitell 테스트) 감지 Platelia의 효소 면역 분석법의 개발 (GM-EIA)로 이어졌다 글루칸,하지만 그들의 세포 벽의 1,4에서이 구성 요소를 결여 mucorales 인치 인가차세대 단클론 항체의 최근 개발 (MAb) 기반 감염 1.5의 대리 마커를 감지 assays하게되었다 이러한 테스트 1,4-6의 정확성을 둘러싼 피소.
손튼 5 최근 IPA의 포인트의 케어 (POC) 진단을위한 immuno-색층 측방 흐름 장치 (LFD)를 개발하는 하이 브리 도마 기술의 사용을 사용하여 Aspergillus-특이적인 mAb (JF5)의 생성을 설명했다. LFD의 가장 큰 장점 MAb JF5는 균류 5의 적극적인 성장 중에 분비되는 세포외 당단백질 항원에 바인딩 이후로 활동을 감지하는 기능입니다. 이러한 Aspergillus의 포자는 흡입된 공기의 일반적인 구성 요소이기 때문에 IPA를 진단하는 폐암 BAL과 같은 유체를 사용하는 경우 이것은 중요한 고려 사항이다. IPA를 진단 장치의 유틸리티는 LFD는 향상된 감도와 사양을 표시 감염의 동물 모델을 사용하여 증명되었습니다ificity는 Platelia GM과 Fungitell (1 → 3)-β-D-글루칸의 assays 7로 비교했다.
여기서는 인간의 혈청 및 BAL 체액에서 Aspergillus 항원을 감지하는 간단한 LFD 절차를 제시. 그것의 속도와 정확도가 haematological 강한 악의 환자에서 IPA의 진단을위한 소설 외래 포인트의 케어 테스트를 제공합니다.
Protocol
Discussion
IPA의 최종 식별은 진정한 생검 샘플에서 etiologic 대리인의 분리에 의해 달성될 수 있지만, 적절한 샘플 회복이 매우 아픈 환자에 자주 불가능하며 Aspergillus는 혈액에서 드물게 복구할 수 있습니다. 주요 진보는 IPA 진단에 가슴 스캔 계산된 단층의 사용되었습니다 있지만, 이러한 "헤일로"또는 "공기 초승달"간판 등 폐 IPA의 암시가 특징 중 일시적이거나 호흡 유물에 의한 것이 또는 다른 곰팡이 감염 11,12합니다. 이러한 데이터는 따라서 환자의 혈청에서 순환되는 체액이나 BAL, 가래 또는 소변 샘플 13 존재 그 곰팡이의 서명 분자를 (GM과 β-글루칸)를 식별하는 것을 목표로 serological 기술을 보충하고 있습니다. 이 테스트는 만족스러운 감도를 표시하는 동안, 그들은 특정 조건 하에서 1,6 충분한 특이성이 부족하거나 간섭에 시달리다 </sup>.
IPA 검출을위한 LFD 테스트는 여기에 제시하는 것은, 대부분의 유명, 바이러스, 박테리아, 기생충 및 독소 14-19의 검출을위한 테스트에 날짜와하는 데 사용되었습니다 IPA와 공격의 기술 '포인트의 케어'진단을 가능하게 첫째 1988 년 Unipath에 의해 도입된 검사 가정용 임신은입니다. 여기에서 설명한 Aspergillus LFD에서 Aspergillus-특이적인 mAb JF5는 다공성 nitrocellulose 막에서 캡쳐 영역 (테스트 라인)로 고정됩니다. 별도의 영역에서 막에 고정 안티 – 마우스 면역 글로불린은 내부 통제 (제어 라인)을 역임했습니다. 릴리스 포트에 혈청이나 BAL 액의 추가에서 분리 패드의 MAb JF5-콜로이드 골드 켤레축가 대상 항원에 바인딩하고 복잡한 그리고 모세관 현상에 의한 다공성 멤브레인 따라 전달합니다. 캡처 영역에 고정화 MAb JF5은 빨간색 테스트 라인의 결과 JF5-콜로이드 골드 항원 복잡한에 바인딩합니다. 모든 언바운드 JF5-콜로이드 골드켤레축는 분석이 제대로 실행되었는지 나타내는 내부 컨트롤에 바인딩합니다. 빨간색 제어 라인에서이 결과를.
테스트를 수행하는 데 단 15 분 복용, 신속한이며, GM과 β-글루칸 검출을 기반으로 혈청 및 BAL 검사에 비해 저렴하고, 고가의 장비 또는 실행할 수있는 다양한 실험 시설을 필요로하지 않습니다. 또한, MAb JF5는 GM과 β-글루칸 테스트 1,4,6의 허위 – 긍정적인 반응을 일으키는 것으로 표시되었습니다 약물이나 오염 물질과 교차 반응하지 않습니다. 현재 진단 테스트를 통해 추가적인 큰 장점은 Aspergillus 종의 침략 성장을 나타내는 것입니다 활동을 감지하는 LFDs 능력입니다.
LFD 프로 시저에서 중요한 단계는 장치에 대한 혈청 또는 BAL 샘플 신청 후 결과 15 분을 읽을 필요가있다. 시험이 5 월 바이어스 결과 interpretati로 결과를 기록하기 전에 이상 15 분 동안 남아있을 수 없습니다에. 약한 반응은 배양 기간을 연장 향상되지 않습니다. 감염 동물 모델에서 혈청의 열처리는 분석 감도를 향상시키는 것으로 확인되었습니다. 시험의 한계는 그것이 질적이라는 것입니다, 그리고 양성의 주관적인 평가를 할 수있는 연산자에 의존합니다. 테스트 라인의 농도는 혈청 및 BAL 샘플 (그림 1)의 항원 내용에 따라 다릅니다. 그러나, 어떤 긍정적인 반응 (알려진 제외 비교에 의해 결정) Aspergillus 항원 따라서 감염의 존재를 나타냅니다. LFD assays의 주관을 제한하려면, 휴대용 디바이스는 LFD 테스트 라인 농도의 부량을 허용하고 항원 검출 20 문턱 값의 설립을 활성화하는 사용할 수 있습니다.
LFD 앞으로의 개발은 상용화 및 기타 침입 곰팡이 병원균의 동시 검출을 허용 멀티 플렉스 LFD의 개발을 포함매우 구체적인 MAbs에게 3을 사용.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
화이자 제한에서 박사 손튼에 자금 것은 기꺼이 인정하고 있습니다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Aspergillus LFD | University of Exeter | Available from the corresponding author on request | |
| RPMI-1640 | Sigma | R0883 | |
| L-Glutamine | Sigma | G7513 | |
| Fetal calf serum | Biosera | S9100 | Other sources of fetal calf serum can be used in the preparation of TCM |
| EDTA | Fisher Scientific | BPE120-1 |
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