Semplice e robusta In vivo E In vitro per lo Studio Assemblea Virus

In positivo-virus con RNA genomi senso patogeno per gli esseri umani, animali e piante, incapsidazione progenie in virioni maturi e stabili è una fase cardinale durante la creazione di infezione in un determinato host. Di conseguenza, lo studio delle incapsidazione decifra le informazioni riguardanti il ​​know-how del meccanismo di regolazione di assemblaggio del virus per formare virioni infettivi. Tale informazione è di vitale importanza nella formulazione di nuovi metodi di arginare diffusione del virus e il controllo delle malattie. Incapsidamento Virus possono essere studiati in vivo e in vitro. Incapsidazione Genoma in vivo è un processo altamente regolato selettiva che le interazioni macromolecolari e compartimentazione subcellulare. Pertanto, lo studio porta a sezionare gli eventi che comprendono incapsidazione virus in vivo avrebbe fornito le conoscenze di base per comprendere come i virus proliferano e assemblare. Recentemente incapsidazione in vitro è stata sfruttata per la ricerca nel campo della biomedica imaging e applicazioni terapeutiche. Non capsulati virus delle piante stanno molto più avanti nella joint venture di incapsidazione in vitro del materiale caricato negativamente straniera. Virus del mosaico Brome (BMV), privi di involucro multicomponente RNA virus patogeno per le piante, è stato utilizzato come sistema modello per lo studio confezionamento genoma in vivo e in vitro. Per i saggi di incapsidamento in Nicotiana benthamiana, mediata da Agrobacterium espressione transiente, si riferiscono come agroinfiltration, è una tecnica efficiente e robusto per la consegna sincronizzata e l'espressione di più componenti alla stessa cella. In questo approccio, una sospensione di cellule di Agrobacterium tumefaciens che trasportano binari vettori plasmidici che trasportano cDNA di mRNA desiredviral è infiltrata nella foglia spazio intercellulare withina utilizzando niente di più sofisticato di una siringa monouso da 1 ml (senza ago). Questo processo determina il trasferimento di inserto di DNA nelle cellule vegetali, il T-DNAInserto rimane transitoriamente nel nucleo e viene quindi trascritto dall'host polimerasi II, con conseguente espressione transiente. La trascrizione mRNA risultante (livellata e poliadenilato) viene poi esportato nel citoplasma per la traduzione. Dopo circa 24 a 48 ore di incubazione, sezioni di foglie infiltrati possono essere prelevati per le analisi biochimiche microscopyor. Agroinfiltration permette grandi numeri (centinaia di migliaia) di cellule trasfettate da simultaneamente. Per incapsidazione in vitro, virioni purificati di BMV sono dissociate in proteina del capside di dialisi contro tampone di cloruro di calcio dissociazione contenente seguita dalla rimozione di RNA e non-virioni dissociate mediante centrifugazione. Genome subunità proteiche del capside impoverito vengono poi riassemblati con desiderati componenti del genoma virale o non virale componenti come indocianina colorante.