Neste artigo de vídeo que descreve o uso de um novo<em> Ex vivo</em> Modelo de herpes simplex vírus tipo agudos eu infecção do epitélio da córnea.
Ceratite herpética é uma das mais graves patologias associadas com o vírus do herpes simplex tipo 1 (HSV-1). Ceratite herpética é actualmente a principal causa de cegueira córnea tanto derivados e infecção associada no mundo desenvolvido. Apresentação típica de ceratite herpética inclui infecção do epitélio da córnea e, por vezes, o estroma eo endotélio da córnea profunda, conduzindo a tais patologias corneanas permanentes como cicatrizes, desbaste, e opacidade 1.
Corneal infecção HSV-1 é tradicionalmente estudada em dois tipos de modelos experimentais. O modelo de vitro, em que as monocamadas de culturas de células epiteliais da córnea são infectadas numa placa de Petri, oferece nível simplicidade, elevado de reprodutibilidade, experiências rápidas, e custos relativamente baixos. Por outro lado, o modelo in vivo, em que os animais, tais como coelhos ou ratos são inoculados directamente na córnea, oferece uma fisiológica altamente sofisticadosistema, mas tem custos mais elevados, experimentos mais longos, cuidado de animais necessário, e um maior grau de variabilidade.
Neste artigo de vídeo, que proporcionam uma demonstração detalhada de um novo modelo ex vivo de corneal epitelial infecção HSV-1, que combina as vantagens de ambos os vitro e em modelos in vivo o. O modelo ex vivo utiliza córneas intactas organotypically mantidas em cultura e infectadas com HSV-1. A utilização do modelo ex vivo permite conclusões altamente fisiologicamente baseados, no entanto, é bastante barato e requer compromisso de tempo comparável à do modelo de vitro.
Neste artigo de vídeo foi descrito um método para o estudo agudo epitelial da córnea infecção por HSV-1 em um modelo ex vivo. Este modelo é um degrau entre a utilidade in vitro e a modelos de vivo, uma vez que permite a validação fisiologicamente precisa dos resultados de cultura de células e, deste modo, limita a quantidade de experimentação animal, que deve ser realizada. Além disso, o modelo ex vivo proporciona uma oportunidade única e valiosa para estudar a i…
The authors have nothing to disclose.
O apoio do Banco de Olhos do Lions de Delaware Valley foi inestimável para este trabalho. Anticorpo monoclonal contra o principal do mouse ICP8 foi um presente tipo de Dr. David Knipe (Harvard Medical School). Agradecemos também o Dr. Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) e Dr. Peter Laibson (Wills Eye Institute) para discussões úteis e conhecimentos.
Reagents/Supplies | Company | Catalogue # |
Minimum Essential Medium (MEM) | Mediatech | 10-010-CV |
Non-Essential Amino Acids (100x solution) | Mediatech | 25-025-CI |
L-Glutamine | Mediatech | 25-005-CI |
Penicillin G Sodium Salt | Sigma | P3032 |
Streptomycin Sulfate Salt | Sigma | S9137 |
Agarose | Invitrogen | 15510-027 |
Phosphate Buffered Saline (PBS) | Prepared in lab | N/A |
Trypsin EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI |
DNeasy Blood & Tissue Kit | QIAGEN | 69504 |
RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 |
Laemmli Buffer | Prepared in lab | N/A |
Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound | Tissue-Tek | 4583 |
Whole Rabbit Eyes (Young) | Pel-Freez | 41211-2 |
Human Corneas and Whole Eyes | Local Eye Bank | N/A |
12 Well Porcelain Spot Plate | Avogadro’s Lab Supply | 1877 |
35 mm Tissue Culture Dish | Falcon | 353001 |
6 Well Cell Culture Plate | Greiner Bio-One | 657160 |
Cryomold Intermediate | Tissue-Tek | 4566 |