בידוד של ריאות תאים דנדריטים עכבר
Summary
הכנה מטוהרים של ריאות תאים דנדריטים עכבר מתואר. דגש ספציפי ניתנת הבידוד של תת קונבנציונאלי תאים דנדריטים.
Abstract
תאים דנדריטים ריאות (DC) לשחק תפקיד מהותי חישה הפולש 1,2 פתוגנים כמו גם בשליטה על התגובות tolerogenic 3 בדרכי הנשימה. לפחות שלושה תת העיקרי של התאים הדנדריטים ריאות תוארו בעכברים: DC קונבנציונלי (CDC) 4, plasmacytoid DC (PDC) 5 ו IFN-בהפקת הרוצח DC (IKDC) 6,7. משנה ה-CDC היא משנה DC הבולטים הריאה 8.
סמן משותף ידוע לזהות תת DC היא CD11c, סוג אני הטרנסממברני integrin (β2) אשר באה לידי ביטוי גם על מונוציטים, מקרופאגים, נויטרופילים חלק מתאי B 9. ברקמות מסוימות, באמצעות CD11c כסמן העכבר לזהות DC תקף, כמו הטחול, שם רוב התאים + CD11c לייצג את קבוצת המשנה CDC המבטא רמות גבוהות של הגדולים מורכבים histocompatibility מחלקה II (MHC-II). עם זאת, הריאה היא רקמה הטרוגנית יותר להיות שםצד תת DC, יש אחוז גבוה של האוכלוסייה תא ברורים המבטא רמות גבוהות של CD11c התקף רמות נמוכות של MHC-II. בהתבסס על האפיון שלה בעיקר על ביטויו של F4/80, סמן macrophage הטחול, היי CD11c MHC-II תא lo האוכלוסייה ריאות זוהה מקרופאגים ריאתי 10 ולאחרונה, כמבשר פוטנציאל DC 11.
בניגוד עכבר PDC, ללמוד את התפקיד הספציפי של ה-CDC בתגובה החיסונית ריאתי הוגבל בשל היעדר של סמן מסוים שיכול לעזור בבידוד של תאים אלה. לכן, בעבודה זו אנו מתארים הליך לבודד מטוהרים עכבר ריאות CDC. הבידוד של ריאתי תת DC מייצג כלי מאוד שימושי כדי לקבל תובנות לתוך הפונקציה של תאים אלה בתגובה פתוגנים בדרכי הנשימה, כמו גם גורמים סביבתיים שיכולים לעורר את התגובה החיסונית לארח בריאה.
Protocol
Discussion
בידוד ריאתי עכבר DC היא טכניקה חשובה לחקר מגוון רחב של גירויים בדרכי הנשימה. תהליך קבלת תאים אלה כולל שלבים קריטיים למנוע אובדן של תאים, כמו גם כדאיות התא וטוהר. המרוססת הריאה לפני איסוף יעזור לחסל את כל התאים הפריפריה כמו גם לצמצם את זיהום אריתרוציטים. השימוש ניתוק או?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מבקשים להודות למרילין דיטריך במתקן cytometry זרימה LSU Core עזרתה עם מיון התא ופיטר Mottram עזרתו עם microphotographs. עבודה זו מומנה על ידי דיילת מכון המחקר הרפואי, את LSU-תחרותי תוכנית פרס המחקר, ו-NIH / NIAID מענקים P20 RR020159 ו R03AI081171.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACK lysing buffer | Invitrogen | D6-0005DG | |
| Anti-mouse CD11c (HL3) | BD Pharmingen | 5580979 | PE-Cy7 conjugated |
| Anti-mouse I-A/I-E (269) | BD-Pharmingen | 553623 | FITC conjugated |
| Collangenase Type 1A | Sigma | 9891-500MG | |
| Cell strainers | BD Falcon | 352340, 352360 | |
| CD11c (N418) Microbeads | Miltenyi | 130-052-001 | |
| DNase I | Sigma | D5025-150KU | |
| Hank’s Balanced Salt solution | Invitrogen | 14170 | |
| Hepes buffer solution | Invitrogen | 15630 | |
| Petri dishes 60 mm | BD Falcon | 351016 | |
| GentleMACS™ C tubes | Miltenyi | 130-093-237 | |
| Gentle MACS dissociator | Miltentyi | 130-093-235 | |
| AutoMACS-Pro™ | Miltenyi | 130-092-545 | |
| FASCS Aria | BD |
References
- Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. Sensing pathogens and tuning immune responses. Science. 293, 253-256 (2001).
- Banchereau, J. Immunobiology of dendritic cells. Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).
- Manicassamy, S., Pulendran, B. Dendritic cell control of tolerogenic responses. Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).
- Steinman, R. M., Cohn, Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).
- Asselin-Paturel, C. Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology. Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).
- Chan, C. W. Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity. Nat. Med. 12, 207-213 (2006).
- Taieb, J. A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance. Nat. Med. 12, 214-219 (2006).
- Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections. Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).
- Sung, S. S. A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins. J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).
- Wang, H. Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process. J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).
- Bhatia, S. Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype. PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).
- Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation. J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).
- Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection. J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).
