Xpert MTB / RIF Testi ile Akciğer Tüberkülozu Tanısı

Akciğer TB şüphesi olan tüm hastalarda bakteriyolojik inceleme için en az iki balgam örneği sunmaları konusunda Verem Bakım devletler için Uluslararası Standartlar Standart 2. Balgam yüksek verim sahiptir, bu zamanda toplanan olarak mümkün olduğunda, en az bir sabah erken numune alınması gerekir. 11 Xpert MTB / assay RIF olarak indüklenen ya ekspektore balgamlari hazırlanan balgam örnekleri veya teksif çökel uygulanabilmektedir . olumlu veya olumsuz aside dirençli basil (ARB) yayma 6, 12, 13 deney var olan akciğer TB klinik şüphesi olduğu hastaların gelen örnekleri ile kullanılmak üzere tasarlanmıştır: 1) anti-tüberküloz tedavisi, 2 almamış ) <7 tedavisinin gün, veya 3) son 60 gün içinde tedavi almadım vardı. bakteriyel dna antimikrobiyal sonrası devam, çünkü ilaç tedavisi 7 etkilerinin izlenmesi için kullanılmaması gerektiğini unutmayın etmeyin. <pclass ="jove_content"> enfeksiyon ajanlarını bulaştırma kapasitesine kullanılmış kartuşları da dahil olmak üzere klinik örneklerin, davranın. Böyle giyen koruyucu tek kullanımlık eldivenler, laboratuar önlüğü ve göz koruyucu gibi uygun önlemler, kullanın ve kurumunuzun güvenlik prosedürleri ve yönergeleri izleyin. 1. Ekspektore Balgam örnekleri Not: olduğu gibi Süreç tek seferde birçok örneği gibi, GeneXpert Dx Sistem testi çalıştırmak için kullanılabilir modülleri! Ilgili örnek kimliği ile her Xpert MTB / RIF kartuş etiketleyin. Transferi 1.0 ml steril bir transferi pipet kullanarak konik, vidalı kapaklı tüpe balgam ekspektore. Alternatif olarak, tüm numune orijinal sızdırmaz balgam toplama kabı işlenebilir. Steril bir aktarım pipet kullanılarak ekspektore balgam etmek; 2.0 ml Xpert MTB / RIF Örnek Reaktif (v / v 02:01) eklenir. Kapağı değiştirin ve gayretle 10 tüp sallayın-20 Kez. Alternatif olarak, karışımın (30 sn) santrifüja edilebilir. Tüp oda sıcaklığında 5 dakika boyunca dik bekletin. Şiddetle 10-20 kat tüpü çalkalayın. Alternatif olarak, (30 sn) bir girdap kullanın. Tüp oda sıcaklığında bir 10 dakika dik bekletin. Örnekleri inceleyin: Numune balgam hiçbir görünür kümeleri ile sıvılaştırılmış edilmelidir. 2. Konsantre Sedimanlar Not: Süreç sadece GeneXpert Dx Sistemi olduğu gibi aynı anda çok sayıda numune olarak testleri çalıştırmak için kullanılabilir modülleri! Ilgili örnek kimliği ile her Xpert MTB / RIF kartuş etiketleyin. Steril bir aktarım pipet kullanarak konik, vidalı kapaklı tüpe 1,5 ml Xpert MTB / RIF Örnek Reaktif aktarın. Steril bir pipet kullanarak transferi Örnek Reaktif içeren tüp için en az 0.5 ml konsantre sediment ekleyin. Kapağı değiştirin ve tüp v sallayınigorously 10-20 kat. Alternatif olarak, (30 sn) bir girdap kullanın. Tüp oda sıcaklığında 5 dakika boyunca dik bekletin. Şiddetle 10-20 kat tüpü çalkalayın. Alternatif olarak, (30 sn) bir girdap kullanın. Tüp oda sıcaklığında bir 10 dakika dik bekletin. Örnekleri inceleyin: Numune balgam hiçbir görünür kümeleri ile sıvılaştırılmış edilmelidir. 3. Xpert MTB / RIF Kartuş Yükleme Not: Kartuş için örnek ekleyerek 30 dakika içinde test başlayın! Xpert MTB / RIF kartuş ve numune ID etiketlerini kontrol edin. Kartuş kapağını açın. Sağlanan steril transferi pipet kullanarak, menisküs asgari işaretinin üstüne kadar transferi pipet içine sıvılaştırılmış örnek aspire ve Xpert MTB / RIF kartuş açık portuna örnek aktarmak. Not:Aerosol oluşumu riski en aza indirmek için yavaş yavaş dağılır! Kartuş kapağını kapatın. 4. Test Başlangıç Not: Teste başlamadan önce, GeneXpert Dx Sistemi GX2.1 yazılımı ile donatılmış olduğundan emin olun ve Xpert MTB / RIF testi yazılımı alınır 9! Bilgisayarınızı açın ve sonra GeneXpert Dx enstrüman açın. Windows masaüstünde, GeneXpert Dx kısayol simgesine çift tıklayın. Kullanıcı adı ve şifrenizi kullanarak GeneXpert Dx Sistemi yazılımı oturum açın. GeneXpert Dx Sistem penceresinde, test Oluştur'u tıklatın. Tarama Kartuş Barkod iletişim kutusu görüntülenir. Örnek kimlik kutusuna tarama veya örnek kimliğini yazın. Xpert MTB / RIF kartuş üzerindeki barkodu tarayın. Oluştur Testi penceresi görüntülenir. Testi Başlat </strong>, ve görünen iletişim kutusunda şifrenizi girin. Yanıp sönen yeşil ışık ile cihaz modülü kapağını açın ve yazıcı kartuşu yükleyin. Kapağını kapatın. Testi başlar ve ışık yanıp sönmek yerine sürekli yeşil kalır. Test tamamlandığında, ışığı söner. Sistemin çalışma sonunda kapı kilidi serbest bırakana kadar bekleyin, sonra modül kapı açın ve kartuşu çıkarın. Kurumunuzun standart uygulamalara göre uygun çöp konteynerleri kullanılan kartuş atın. 5.. Temsilcisi Sonuçlar Her Xpert MTB / RIF kartuş MTB kompleksi ve RIF direncinin algılama gibi hedef bakteriler, yeterli işlem için kontrol etmek ve PCR reaksiyonunda inhibitörü varlığında (ler) izlemek için bir örnek işleme kontrolü (SPC) için reaktifler içeren . Prob Check Control (PCC) PCR tüp dolum, reaktif rehidrasyon doğrularkartuşu, prob bütünlüğü ve boya kararlılık. Xpert MTB / RIF testinde 9 primerler 81 baz çifti "çekirdek" bölgesini içeren rpoB geni bir kısmını yükseltmek. Moleküler işareti olarak bilinir Beş farklı renkte Flourogenik nükleik asit hibridizasyon probları, tüm 81-bp çekirdekli sorgularız. 14 Her moleküler işaret hedef dizisi vahşi tip rpoB farklıysa bu hedefine bağlamak değil, böylece özel olarak tasarlanmıştır Bir tek nükleotid ikamesi gibi azar dizisi. Bunlar, hedeflerine, yani, yabanıl tür rpoB sekansı bağlanmıştır yalnızca moleküler işaretçileri floresansı yana deneyde, beş renklerin her birinin yokluğu ile ilişkili olan çekirdek bölgede korunmuş yabani tipteki sekansı ve mutasyonlar arasındaki ayrım RIF direnci. 6 SPC olumsuz bir örnek pozitif olmalı ve pozitif bir örnek negatif veya pozitif olabilir. TestSPC negatif test tespit değilse sonuç "geçersiz" olacaktır. PCR reaksiyonu başlamadan önce, GeneXpert Dx Sistemi boncuk rehidrasyon, reaksiyon-tüp dolum, prob bütünlüğü ve boya istikrarı izlemek için problardan floresans sinyal ölçer. Problardan floresans sinyal atanan kabul kriterlerini karşılıyorsa, PCC geçer. Ölçülen sonuçlar floresan sinyalleri ve gömülü hesaplama algoritmaları GeneXpert Dx Sistem tarafından yorumlanır ve Sonuçları penceresinde 9 görüntülenir, aşağıda belirtilmiştir: MTB Tespit: MTB hedef DNA tespit edildiğinde; her iki denetim, SPC ve PCC, atanan kabul kriterleri karşılamaktadır. Alt Ct değerlerini DNA örneğinin daha yüksek bir başlangıç ​​konsantrasyonu temsil eder; yüksek Ct değerlerini DNA örneğinin daha düşük bir konsantrasyon temsil eder. MTB DETECTED sonuçlarında "RIF Direniş DETECTED" (Şekil 1A), ("RIF direnç saptanmamıştır" <strong> Şekil 1B), ya da "RIF Direniş BELİRSİZ" ayrı bir satırda görüntülenir. MTB Algılanmadı: MTB hedef DNA tespit değildir; her iki denetim, SPC ve PCC, atanan kabul kriterleri (Şekil 2) buluşuyor. Geçersiz: MTB varlığı veya yokluğu tespit edilemeyen: SPC kabul kriterlerine uymuyorsa, yani örnek düzgün işlenmedi, veya PCR inhibe edilmiştir (Şekil 3). Not: Ekstra numune ile tekrar test! Hata: (FAIL) başarısız PCC sonuçlarından biri veya daha fazlası. MTB ve SPC Hem NO SONUÇ gösterilecek. Not: Ekstra numune ile tekrar test! PCC (PASS) geçerse, hata bir sistem bileşeni hatası neden olmaktadır. Şekil 1: MTB hedef DNA tespit edildiğinde; her iki denetim, SPC ve PCC, atanan kabul kriterleri karşılamaktadır. Alt Ct değerleri daha yüksek bir başlangıç ​​temsilDNA örneğinin konsantrasyonu; yüksek Ct değerlerini DNA örneğinin daha düşük bir konsantrasyon temsil eder. MTB DETECTED sonuçlarında "BELİRSİZ RIF Direniş" ayrı bir satırda gösterir (Şekil 1B) "RIF Direniş DETECTED", ya da, (Şekil 1A) "RIF direnç saptanmamıştır." . Şekil 1A MTB DETECTED; RIF Direnç 81-bp RIF rpoB geni direnç belirleyici bölgesi (RRDR) yani sadece yabani tip nükleik asit dizisi, DETECTED DEĞİL mevcuttu 6. büyük rakam görmek için buraya tıklayın . . Şekil 1B MTB DETECTED; RIF Direnç algılandı. Pozisyonları kapsayan, Probe B (ok) terk tamamlayın R 513-517 RpoB geni RDR. 6 örnekte, kısmi sıralama rpoB gen mutasyonu D516V tespit edildiğini ortaya koymuştur. 8 büyük rakam görmek için buraya tıklayın . Şekil 2 MTB hedef DNA tespit edilmedi;.. Her iki denetim, SPC ve PCC, atanan kabul kriterlerini karşılayan büyük rakamı görmek için buraya tıklayın . Örnek düzgün işlenmiş değil çünkü, SPC kabul kriterlerine uymayan ya da PCR inhibe çünkü:. MTB Şekil 3 Geçersiz test sonucu, yani varlığı veya yokluğu tespit edilemez.3547fig3large.jpg "target =" _blank "> büyük rakamı görmek için buraya tıklayın.