光谱共焦成像的荧光标记的尼古丁受体敲在慢性尼古丁政府小鼠

配体门控离子通道，在中枢神经系统（CNS）有牵连的有严重的医疗和社会后果的许多条件。例如，通过吸烟尼古丁成瘾的首要原因是全球过早死亡（世界卫生组织）和可能造成的离子通道分布在大脑中的变更^1。慢性尼古丁暴露于啮齿动物和人类的烟碱乙酰胆碱受体（nAChRs）的脑组织^1-3人数增加的结果。同样，在谷氨酸GluN1或GluA1渠道，改变已牵连到其它能使人成瘾的药物，如可卡因，安非他明和鸦片^4-6引发过敏。

因此，映射和量化特定的离子通道的分布和表达模式的能力是极为重要的理解成瘾的机制。研究大脑的特定区域的EF个别药物fects先进的技术，如放射性配体的问世。然而，低放射性配体结合的空间分辨率，防止量化在特定的神经元亚型配体门控离子通道的能力。

基因编码的荧光记者，如绿色荧光蛋白（GFP）和它的许多颜色的变种^，7生物学领域的一个革命性的基因标记内源性蛋白，可以可视化的蛋白质在体内 ^7-10荧光记者。用探针荧光标记蛋白质的优势之一是消除抗体的使用，有目标蛋白的非特异性和无障碍的问题。我们已经用这种战略荧光标签nAChRs，这使福斯特共振能量转移（FRET）在转染细胞培养¹¹受体装配研究。最近，我们已经使用了KNOCK-工程师与黄色荧光蛋白标签胆碱受体α4亚基（α4YFP）的，能够精确量化的亚微米决议通过光谱共焦显微镜¹²中枢神经系统的神经元的受体体外小鼠的方法。针对性的荧光敲在突变中的内源性的轨迹和其本地子的控制之下，成立生产受体的表达和调控的正常水平相比，在野生型小鼠无标记的受体时。这个连锁反应中的方法可以扩展到其他离子通道的荧光标记，并提供了一​​个可视化和量化受体在中枢神经系统的功能强大的方法。

在本文中，我们描述了一种方法来量化在特定的中枢神经系统神经元暴露后慢性尼古丁胆碱受体表达的变化。我们的方法包括微型渗透泵植入术，心内灌注固定，成像和荧光标记的烟碱REC分析eptor亚基从α4YFP敲入小鼠（图1）。我们已经优化了固定技术，从固定脑tissue.We的，以尽量减少自体荧光，在详细描述我们的成像方法，利用光谱共聚焦显微镜结合线性光谱分离算法减去autofluoresent为了准确地获取α4YFP荧光信号的信号。最后，我们表明慢性尼古丁诱导的海马内侧perforant的路径α4YFP受体上调的结果。