Расширение периферической крови человека γδ T клеток с использованием Zoledronate

Человек γδ Т-клетки могут распознавать и реагировать на широкий спектр стресс-индуцированного антигенами, тем самым развивается врожденная широкий противоопухолевыми и антибактериальными деятельности. ¹ Большинство γδ Т-клеток в периферической крови у Vγ9Vδ2 Т клеточного рецептора. Эти клетки распознают антиген главного комплекса гистосовместимости-независимым способом и развивать сильные цитолитического и Th1-подобный эффекторные функции. ¹ Таким образом, γδ Т-клетки являются привлекательным кандидатом эффекторных клеток рака иммунотерапия. Vγ9Vδ2 Т-клеток реагировать на phosphoantigens, такие как (E)-4-гидрокси-3-метил-бут-2-енил пирофосфат (HMBPP), который синтезируется в бактериях посредством биосинтеза изопреноидов, ² и isopentenyl пирофосфат (IPP), который производится в эукариотических клетках через мевалоната пути. ³ В физиологическом состоянии, поколения ИПП в nontransformed ячейка не является достаточным для активации γδ Т-клеток. Дисрегуляция мевалоната пути в опухолевых клетках приводит к накоплению IPP и γδ Т-клеток, активации. ³ Поскольку аминобисфосфонатов (таких, как памидронат или золедронат) тормозят фарнезил синтазы пирофосфат (ГЛС), фермент действует на выходе из ИПП в мевалоната пути, внутриклеточные уровни IPP и sensitibity к γδ признание Т-клеток может быть терапевтически увеличился на аминобисфосфонатов. IPP накопления менее эффективен в nontransfomred клеток, чем опухолевые клетки с фармакологически соответствующей концентрации аминобисфосфонатов, которые позволяют нам иммунотерапии рака путем активации Т-клеток γδ с аминобисфосфонатов. ⁴ Интересно, что IPP накапливается в моноциты, когда РВМС относятся с аминобисфосфонатов, из-за эффективной наркотиков поглощение этих клеток. Моноциты ^5, которые накапливаются IPP стать антиген-представляющих клеток и стимулируют Vγ9Vδ2 Т-клеток в периферической крови. ⁶ На основе этих механизмов, мы разработали методику для крупномасштабного расширения γδ культурах клеток Т использованием золедронат и интерлейкина -2 (IL-2). ⁷ Другие методы для расширения γδ Т-клетки используют синтетические bromohydrin phosphoantigens пирофосфат (BrHPP) ⁸ или 2-метил-3-бутенил-1-пирофосфат (2M3B1PP) ^9. Все эти методы позволяют бывшим естественных условиях расширения, в результате чего большое количество γδ Т-клеток для использования в приемных иммунотерапии. Однако, только золедронат является FDA утвержденных коммерчески доступных реагентов. Zoledronate расширенной γδ Т-клетки CD27 дисплей ^– CD45RA ^– эффектор фенотип памяти и их функции могут быть оценены IFN-γ производства анализа ^7.