解剖宿主 - 病毒相互作用模型疱疹病毒裂解性复制
Summary
我们描述了一个协议来识别主机的信号分子裂解性复制的模型疱疹病毒，γ疱疹病毒68（γHV68）的关键角色。利用转基因小鼠品系和胚胎成纤维细胞裂解性复制γHV68，该协议允许表型特征和在病毒裂解复制的病毒 – 宿主相互作用的分子审问。
Abstract
在对病毒感染的反应，主机开发各种防御反应，激活先天免疫信号转导途径，导致抗病毒细胞因子的产生1,2等。为了殖民主机，是专病毒逃避宿主抗病毒反应和处理信号转导通路。揭开宿主 – 病毒相互作用，揭示了对抗病毒感染的新的治疗策略的发展。
小鼠γHV68是密切相关的人类致癌卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒和Epsten的EB病毒3,4。在实验室老鼠提供了一个听话的小动物模型来研究宿主反应和病毒感染的整个过程，这是不是人类疱疹病毒在体内的 γHV68感染。在这个协议中，我们提出了一个面板的表型特征的方法和分子剖析主机的信号传输元件的在γHV68裂解replic通报BULLETIN无论是在体内和体外 。在γHV68急性感染体内的转基因小鼠品系的可用性允许在审讯主机信号转导通路中的作用。此外，小鼠胚胎成纤维细胞（MEF中），可以使用从这些缺陷的小鼠品系中分离进一步解剖这些分子的作用，在γHV68裂解复制体外 。
使用病毒学和分子生物学分析，我们可以找出宿主 – 病毒相互作用的分子机制，并确定必要病毒裂解复制的宿主和病毒基因。最后，细菌人工染色体（BAC）的系统有利于突变引入到病毒因子（s），专门中断的宿主 – 病毒相互作用。携带这些突变基因重组γHV68可以用来概括MEFs细胞的表型的γHV68裂解性复制缺陷的在关键主机信号组件。此协议提供了一个很好的策略，询问宿主-病原体相互作用， 在体内和体外的多层次的干预。
最近，我们发现，γHV68侵占先天免疫信号转导通路促进病毒裂解性复制。具体而言，γHV68原发感染激酶IKKβ激活免疫激活IKKβ磷酸化的主病毒的转录因子，复制和反式激活（RTA），促进病毒的转录激活。在这样做时，γHV68有效地夫妇的转录激活机体天然免疫激活，从而促进病毒的转录和裂解性复制。该研究提供了一个很好的例子，可以应用到其他病毒询问宿主 – 病毒相互作用。
Protocol
Discussion
在对病毒感染的反应，MAVS依赖先天免疫信号通路的激活，促进了生产的抗病毒炎性细胞因子10-14。作为模型病毒对人类的致癌性卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒，EB病毒3,4使用鼠γHV68的，我们发现，γHV68侵占MAVS-IKKβ的途径，通过促 进病毒裂解性复制转录激活5。采用转基因MEFs和技术在分子病毒学，该协议可以有效识别的信令组件的一个特定的途径是至关重要的γHV68裂解性?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者要感谢詹姆斯博士（张志坚）提供必要的试剂，包括小牛– / –小鼠，并任日（美国加州洛杉矶大学，药理学和分子医学博士陈（UT西南，分子生物学） ）提供的细菌人工染色体的γHV68本研究。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 11668-019 |
| Electro-MAX DH10B competent cells | Invitrogen | 18290-015 |
| Methylcellulose | Sigma | M0512 |
| POWERPREP HP Plasmid Miniprep System | OriGene | NP100004 |
| POWERPREP HP Plasmid Midiprep System | OriGene | NP100006 |
References
- Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. Pathogen recognition and innate immunity. Cell. 124, 783-801 (2006).
- Medzhitov, R. Recognition of microorganisms and activation of the immune response. Nature. 449, 819-826 (2007).
- Speck, S. H., Virgin, H. W. Host and viral genetics of chronic infection: a mouse model of gamma-herpesvirus pathogenesis. Curr. Opin. Microbiol. 2, 403-409 (1999).
- Speck, S. H., Ganem, D. Viral latency and its regulation: lessons from the gamma-herpesviruses. Cell Host Microbe. 8, 100-115 (2010).
- Dong, X. Murine gamma-herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to initiate lytic replication. PLoS Pathog. 6, e1001001-e1001001 (2010).
- Strauss, W. M., Ausubel, F. M. Preparation of genomic DNA from mammalian tissues. Current Protocols in Molecular Biology. , 2-2 (1998).
- Song, M. J. Identification of viral genes essential for replication of murine gamma-herpesvirus 68 using signature-tagged mutagenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102, 3805-3810 (2005).
- Hirt, B. Selective extraction of polyoma DNA from infected mouse cell cultures. J. Mol. Biol. 26, 365-369 (1967).
- Eva-Maria Borst, E., Crnkovic-Mertens, I., Messerle, M., Zhao, S., Stodolsky, M. Cloning of β-herpesvirus genomes as bacterial artificial chromosomes. Methods in Molecular Biology. , 256-256 (2004).
- Sun, Q. The specific and essential role of MAVS in antiviral innate immune responses. Immunity. 24, 633-642 (2006).
- Seth, R. B., Sun, L., Ea, C. K., Chen, Z. J. Identification and characterization of MAVS, a mitochondrial antiviral signaling protein that activates NF-kappaB and IRF 3. Cell. 122, 669-682 (2005).
- Kawai, T. IPS-1, an adaptor triggering RIG-I- and Mda5-mediated type I interferon induction. Nat. Immunol. 6, 981-988 (2005).
- Meylan, E. Cardif is an adaptor protein in the RIG-I antiviral pathway and is targeted by hepatitis C virus. Nature. 437, 1167-1172 (2005).
- Xu, L. G. VISA is an adapter protein required for virus-triggered IFN-beta signaling. Mol. Cell. 19, 727-740 (2005).
