Caratterizzano Erbivoro meccanismi di resistenza: Spittlebugs su Brachiaria Spp. come esempio

1. Piante Talee singola a partire da piante mature sono utilizzati come unità sperimentali. Le talee sono tagliati a 10 cm per garantire uniformità di piantine. Per prevenire la contaminazione da agenti patogeni delle piante, le talee vengono lavati in una soluzione di ipoclorito di sodio al 3% per 2 minuti e poi sciacquate con acqua di rubinetto thoughroughly. Ogni taglio è piantato in ca. 36 g di terreno sterile in un tubo cilindrico in PVC (5,3 centimetri di diametro esterno di 6,5 cm di altezza) chiuso all'estremità inferiore con un bicchiere di polistirolo e ricoperto con una boccola in PVC. Il taglio è tenuta in posizione da un anello di gommapiuma posto nel foro centrale della boccola. Le piante sono fecondati e innaffiato secondo necessità per mantenere l'umidità del terreno adeguato. Le piante cresceranno per un mese prima di essere sfidato da insetti, permettendo lo sviluppo delle radici superficiali, che servono come siti di alimentazione per la root-xilema al seno ninfe spittlebug. Tubi in PVC con barbatelle sono invertite per 8 giorni prima di infestazione per stimolare ulteriormente la crescita delle radici superficiali, in parte aggiustamento per le differenze inerenti l'architettura radice. Questa fase richiede una fonte artificiale di luce, che mettiamo a disposizione per 24 ore al giorno. Per evitare fughe di confondimento da erbivori con resistenza erbivoro, singolo impianto si replica con radici superficiali poche o nessuna, dopo questo trattamento inversione sono eliminati dalla esperimento. Questa eliminazione deve essere rara, mai comportare l'eliminazione del genotipo che rappresentano. 2. Insetti Spittlebugs adulti sono raccolti dal campo, identificato per specie, e la deposizione delle uova introdotto a gabbie in cui vengono forniti fogliame di brachiariagrasses suscettibili di nutrirsi. Le femmine depongono le uova nel suolo contenute in un vassoio superficiale rimovibile posto sul fondo delle gabbie. Dopo alcuni giorni, il terreno è sospeso in acqua e passato attraverso una serie di setacci (42, 60 e 150 mesh) per raccogliere le uova. Sospendere il materiale setacciato in una soluzione salina al 30% provoca le uova mature di galleggiare, lasciando dietro di sé le uova immature e qualsiasi materia organica residua. Per prevenire la contaminazione da agenti patogeni degli insetti, le uova vengono disinfettati in una soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,5% per 5 minuti e poi sciacquate con acqua distillata. Ciascuna pianta (unità sperimentale) è infestata sulla superficie del suolo con sei uova mature. Solo uova secolari, vicino al cova vengono selezionati per infestazioni. Essi possono essere identificati dalla presenza di due punti rossi nella loro parte anteriore, corrispondente agli occhi dell'insetto; segna rosa nella loro parte posteriore, corrispondente al addome dell'insetto, e completamente ampliato opercolo. Cova successo è confermato 4 d più tardi, a questo punto le uova non schiuse è sostituito da un spittlebug neonato dalla nostra colonia. Impianti di prova sono disposti in un disegno randomizzato blocco completo con sei repliche per ogni genotipo. 3. Valutazioni L'esperimento è valutato circa. 30 d dopo l'infestazione (tempi esatti variano a seconda della specie di insetti studiato). I danni sono valutati su una scala 1-5 visivo, dove 1 corrisponde a nessun danno visibile e 5 corrisponde ad un impianto di morti (Figura 1). Punteggio danni impianto fornisce una stima della tolleranza. Figura 1. Danni scala usata per valutare la tolleranza al spittlebug erbivori in Brachiaria spp. 1 = nessun danno rilevabile; 2 = fogliame 0-25% necrotico, 3 = 25-50% foglie necrotiche; 4 = 50-75% foglie necrotiche; 5 = fogliame 75-100% necrotico. Sopravvivenza degli insetti viene valutata contando gli insetti di raggiungere sia il loro instar finale o stadio adulto (Figura 2). Punteggio per la sopravvivenza di insetti fornisce una stima della antibiosi. Figura 2. Spittlebug sviluppo di prima instar (a sinistra) per adulti (a destra). Solo gli insetti raggiungono almeno i loro instar finale (frecce) alla data di valutazione sono contati come "sopravvissuti". 4. Rappresentante risultati I risultati di un rappresentante ibridi Brachiaria test di screening per la resistenza alla Aeneolamia spittlebug reducta sono presentati nella Figura 3. Figura 3. I risultati di uno screening ibridi Brachiaria per la resistenza alle spittlebug Aeneolamia reducta. Consideriamo piante resistenti se la loro risposta alla erbivori cade nella metà inferiore di questa trama. Aumenta antibiosi da destra a sinistra e la tolleranza aumenta dall'alto verso il basso. Le frecce indicano la nostra controlli resistenti.