ניתוח תזרים cytometry של תאים חיסוניים בתוך Aortas Murine
Summary
מאמר זה מציג cytometry מבוססי זרימת שיטה לחקור את הרכב החיסון של aortas. העיתון גם מדגים טכניקה נוספת המאפשרת לבחון adventitia שמסביב קיר כלי בנפרד. שיטה זו פותחת אפשרויות לבצע ניתוחים phenotypical של לויקוציטים אבי העורקים וליישם מבחני החיסונית מספר מחקרים טרשת עורקים.
Abstract
טרשת עורקים היא תהליך דלקתי כרוני של כלי גודל בינוניים וגדולים אשר מאופיין על ידי היווצרות של פלאק המורכב תאים קצף, תאים של מערכת החיסון, כלי הדם לתאי השריר אנדותל וחלק, טסיות דם, תאי מטריקס, וגרעין שומנים עשירים עם נמק נרחב סיסטיק של הרקמות הסובבות. 1 נשק מולד אדפטיבית של התגובה החיסונית מעורבים בפיתוח ייזום, והתמדה של טרשת עורקים. 2, 3 יש גוף משמעותי של ראיות תת שונים של תאים חיסוניים, כגון מקרופאגים, דנדריטים תאים לימפוציטים מסוג T ו-B, נמצאים בתוך aortas של עכברים בריאים טרשת עורקים נוטה 4. בנוסף, תאים של מערכת החיסון נמצאים adventitia אבי העורקים המקיפים אשר טוען תפקיד חשוב של רקמת זה atherogenesis 2.
במשך זמן מה, גילוי כמותי של סוגים שונים של תאים חיסוניים, מצב ההפעלה שלהם, את ההרכב התאי בתוך הקיר אבי העורקים היה מוגבל על ידי RT-PCR ושיטות immunohistochemical למחקר של טרשת עורקים. ניסיונות נעשו כדי לבצע cytometry זרימה באמצעות aortas האדם, מספר בעיות, כגון autofluorescence גבוה, דווחו 5,6. פלאק טרשת עורקים האדם היו מתעכל עם collagenase 1, ותאי חינם נאספו מוכתם עבור CD14 + / + CD11c להדגיש macrophage הנגזרות תאים קצף. במחקר זה, ערוץ "מדומה" שימש כדי למנוע חיוביות שגויות מכתים. 6 חומרי נקרוטי המצטבר במהלך תהליך העיכול להצמיח כמות גדולה של פסולת שיוצר autofluorescence גבוהה בדגימות אבי העורקים. כדי לפתור בעיה זו, פאנל של בקרות שלילי וחיובי הוצע, אבל רק מכתים כפול יכול להיות מיושם בדגימות אלה. פיתחנו תזרים חדש cytometry מבוססי שיטה 7 לנתח את ההרכב תא החיסון ולאפיין את ההפעלה, ההפצה, התמיינות של תאים חיסוניים באבי העורקים בריא טרשת עורקים נוטה. שיטה זו מאפשרת את החקירה של הרכב תא החיסון של הקיר אבי העורקים ופותחת אפשרויות לשימוש מגוון רחב של שיטות אימונולוגיות לחקירות היבטים החיסונית של מחלה זו.
Protocol
Discussion
כאן, אנו מציגים שיטה זרימה cytometry מבוססי לחקירה של הרכב של תא החיסון aortas Murine. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא היכולת לנתח תאים חיסוניים אבי העורקים בכל הרמות תא בודד כדי לאפיין את מצב ההפעלה של לויקוציטים אבי העורקים. שיטה זו אינה מוגבלת aortas Murine ואנחנו (נתונים שלא פורסמו) ו?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענק: PO1 HL55798 (כדי KL) ו – American Heart Association המדען פיתוח גרנט 0525532U (אל למשל).
Materials
| Material | Catalog Number | Company |
| Collagenase XI | C7657 | Sigma-Aldrich |
| Hyaluronidase | H3506 | Sigma-Aldrich |
| DNase I, type 2 | D4527 | Sigma-Aldrich |
| Collagenase I | C0130 | Sigma-Aldrich |
| Collagenase II | LS004174 | Worthington Biochemical Corporation |
| Elastase | LS002292 | Worthington Biochemical Corporation |
References
- Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-2341 (2000).
- Galkina, E., Ley, K. Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis. Annu Rev Immunol. 27, 165-197 (2009).
- Hansson, G. K., Libby, P. The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword. Nat Rev Immunol. 6, 508-519 (2006).
- Galkina, E., Ley, K. Leukocyte influx in atherosclerosis. Curr Drug Targets. 812, 1239-1248 (2007).
- Bonanno, E., Mauriello, A., Partenzi, A., Anemona, L., Spagnoli, L. G. Flow cytometry analysis of atherosclerotic plaque cells from human carotids: a validation study. Cytometry. 39, 158-165 (2000).
- Liu-Wu, Y., Svenningsson, A., Stemme, S., Holm, J., Wiklund, O. Identification and analysis of macrophage-derived foam cells from human atherosclerotic lesions by using a “mock” FL3 channel in flow cytometry. Cytometry. 29, 155-164 (1997).
- Galkina, E., Kadl, A., Sanders, J., Varughese, D., Sarembock, I. J., Ley, K. Lymphocyte recruitment into the aortic wall before and during development of atherosclerosis is partially L-selectin dependent. J Exp Med. 203, 1273-1282 (2006).
- Tung, J. W., Parks, D. R., Moore, W. A., Herzenberg, L. A., Herzenberg, L. A. New approaches to fluorescence compensation and visualization of FACS data. Clin Immunol. 110, 277-283 (2004).
- Smith, E., Prasad, K. M., Butcher, M. Blockade of interleukin-17A results in reduced atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice. Circulation. 121, 1746-1755 (2010).
- Eid, R. E., Rao, D. A., Zhou, J. Interleukin-17 and interferon-gamma are produced concomitantly by human coronary artery-infiltrating T cells and act synergistically on vascular smooth muscle cells. Circulation. 119, 1424-1432 (2009).
