Flowcytometrie-analyse van de immuuncellen Binnen Murine aorta

Atherosclerose is een chronisch ontstekingsproces van middelgrote en grote schepen die wordt gekenmerkt door de vorming van plaques bestaande uit schuimcellen, immuuncellen, vasculaire endotheliale en gladde spiercellen, bloedplaatjes, extracellulaire matrix, en een lipide-rijke kern met uitgebreide necrose en fibrose van de omliggende weefsels. ¹ De aangeboren en adaptieve armen van de immuunrespons betrokken zijn bij de initiatie, ontwikkeling en voortbestaan ​​van atherosclerose. ^{2, 3} Er is een aanzienlijke hoeveelheid bewijs dat verschillende subgroepen van de immuun cellen, zoals macrofagen, dendritische cellen, T-en B-lymfocyten, zijn aanwezig in de aorta's van gezonde en atherosclerose-gevoelige muizen ^4. Daarnaast worden immuuncellen in de omliggende aorta adventitia, die een belangrijke rol van dit weefsel suggereert in atherogenese ^2.

Al enige tijd werd de kwantitatieve detectie van verschillende soorten immuuncellen, de activatie-status, en de cellulaire samenstelling binnen de aorta beperkt door de RT-PCR en immunohistochemische methoden voor de studie van atherosclerose. Er zijn maar weinig pogingen werden ondernomen om flowcytometrie met behulp van menselijke aorta uit te voeren, en een aantal problemen, zoals een hoge autofluorescentie, zijn gemeld ^5,6. Human atherosclerotische plaques werden verteerd met collagenase 1, en vrije cellen werden verzameld en gekleurd voor CD14 + / + CD11c tot macrofaag-afgeleide schuimcellen te markeren. In deze studie werd een 'mock "kanaal gebruikt om vals-positieve kleuring te vermijden. ⁶ necrotische materiaal accumuleren tijdens het verteringsproces leiden in een grote hoeveelheid puin dat een hoge autofluorescentie bij aorta-monsters genereert. U lost dit probleem, heeft een panel van negatieve en positieve controles voorgesteld, maar slechts twee kleuren kan worden toegepast in deze monsters. We hebben een nieuwe flow cytometrie-gebaseerde methode ⁷ om het immuunsysteem cel samenstelling te analyseren en te karakteriseren de activatie, proliferatie, differentiatie van immuuncellen in gezonde en atherosclerose-gevoelige aorta. Deze methode maakt het mogelijk het onderzoek van de immuun cel samenstelling van de aorta en opent mogelijkheden om een ​​breed spectrum van immunologische methoden voor het onderzoeken van het immuunsysteem van aspecten van deze ziekte.