流式细胞仪分析小鼠主动脉内流的免疫细胞
Summary
本文介绍一个基于流式细胞仪的方法进行调查的主动脉免疫组成。该文件还说明了一个额外的技术，允许单独审视周围的外膜和血管壁。这种方法打开执行主动脉白细胞表型分析，适用于动脉粥样硬化研究的几种免疫检测的可能性。
Abstract
动脉粥样硬化是一种慢性炎症过程大中型船只的特点是形成泡沫细胞，免疫细胞，血管内皮细胞和平滑肌细胞，血小板，细胞外基质，具有广泛坏死富含脂质核心组成的斑块和周围组织纤维化1先天免疫和适应性免疫反应的武器是参与动脉粥样硬化的启动，发展和持久2，3是一个显着的证据机构，不同亚群的免疫细胞，如巨噬细胞，树突状细胞，T和B淋巴细胞，在目前的健康，易发生动脉粥样硬化小鼠 4主动脉。此外，免疫细胞被发现在周围，这表明这个组织的重要作用，在动脉粥样硬化的主动脉外膜2。
一段时间以来，不同类型的免疫细胞，它们的激活状态，和主动脉壁内细胞成分的定量检测RT – PCR和免疫组织化学方法对动脉粥样硬化的研究是有限的。作了一些尝试执行流式细胞仪利用人体的主动脉，和一些问题，如高自体荧光，已报告 5,6 。人类动脉粥样硬化斑块1胶原酶消化，收集游离细胞和CD14的染色+ /表面CD11c +突出的巨噬细胞源性泡沫细胞。在这项研究中，一个“模拟”通道使用，以避免假阳性染色。6坏死性材料，在消化过程中积累了大量的碎片，产生在主动脉样品的自体荧光上升。要解决这个问题，阴性和阳性对照小组已经提出，但只有双染色可以应用于这些样本。我们已经开发出一个新的流式细胞仪为基础的方法，分析免疫细胞的组成和特征的活化，增殖，免疫细胞分化的健康，易发生动脉粥样硬化主动脉。此方法使主动脉壁的免疫细胞组成的调查，并打开使用广谱的免疫学方法对这种疾病的免疫方面的调查的可能性。
Protocol
Discussion
在这里，我们提出了一个基于流式细胞仪检测的免疫细胞组成的小鼠主动脉的调查方法。这种方法的主要优点是能够分析主动脉免疫细胞在单细胞水平和表征主动脉白细胞的激活状态。这种方法不仅限于小鼠主动脉和我们（未发表数据）和其他 10用这种方法来分析人体标本，如乳内动脉，主动脉瓣和冠状动脉。这种方法的一个限制是恢复单一主动脉小鼠主动脉白细胞数量相对较少。虽然?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由国家批卫生研究院：PO1 HL55798（吉隆坡）和美国心脏协会的科学家开发授予0525532U（EG）的支持。
Materials
| Material | Catalog Number | Company |
| Collagenase XI | C7657 | Sigma-Aldrich |
| Hyaluronidase | H3506 | Sigma-Aldrich |
| DNase I, type 2 | D4527 | Sigma-Aldrich |
| Collagenase I | C0130 | Sigma-Aldrich |
| Collagenase II | LS004174 | Worthington Biochemical Corporation |
| Elastase | LS002292 | Worthington Biochemical Corporation |
References
- Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-2341 (2000).
- Galkina, E., Ley, K. Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis. Annu Rev Immunol. 27, 165-197 (2009).
- Hansson, G. K., Libby, P. The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword. Nat Rev Immunol. 6, 508-519 (2006).
- Galkina, E., Ley, K. Leukocyte influx in atherosclerosis. Curr Drug Targets. 812, 1239-1248 (2007).
- Bonanno, E., Mauriello, A., Partenzi, A., Anemona, L., Spagnoli, L. G. Flow cytometry analysis of atherosclerotic plaque cells from human carotids: a validation study. Cytometry. 39, 158-165 (2000).
- Liu-Wu, Y., Svenningsson, A., Stemme, S., Holm, J., Wiklund, O. Identification and analysis of macrophage-derived foam cells from human atherosclerotic lesions by using a “mock” FL3 channel in flow cytometry. Cytometry. 29, 155-164 (1997).
- Galkina, E., Kadl, A., Sanders, J., Varughese, D., Sarembock, I. J., Ley, K. Lymphocyte recruitment into the aortic wall before and during development of atherosclerosis is partially L-selectin dependent. J Exp Med. 203, 1273-1282 (2006).
- Tung, J. W., Parks, D. R., Moore, W. A., Herzenberg, L. A., Herzenberg, L. A. New approaches to fluorescence compensation and visualization of FACS data. Clin Immunol. 110, 277-283 (2004).
- Smith, E., Prasad, K. M., Butcher, M. Blockade of interleukin-17A results in reduced atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice. Circulation. 121, 1746-1755 (2010).
- Eid, R. E., Rao, D. A., Zhou, J. Interleukin-17 and interferon-gamma are produced concomitantly by human coronary artery-infiltrating T cells and act synergistically on vascular smooth muscle cells. Circulation. 119, 1424-1432 (2009).
