成年斑马鱼肾脏的解剖

1。成年斑马鱼肾脏的解剖，从一个不固定的动物样本选择解剖年龄在3-6个月之间的成年斑马鱼。 安乐死的鱼放入一盘0.2％Tricaine pH值7.0，约4-5分钟，仔细观察看到的鳃停止移动和心脏停止跳动。 用勺子，电梯从Tricaine洗澡的鱼在少量溶液，倾倒的解决方案，轻轻地放在纸巾上的动物。 使用一双解剖剪刀锋利，以消除动物的头，作出削减仅次于鳃鳃盖（图1，路径A）。丢弃在生物危险废物的容器的头部。 用解剖剪刀，长腹切口，从头部开始，终止和尾鳍的基础（图1，路径B）尾巴，动物的身体打开。 用一双解剖镊子/钳取出的动物内脏器官，和生物危险废物。小心勿刷背体壁，因为这是肾脏的位置（图2）。如果你选择了一个女性的鱼，你将需要舀体腔，可最容易使用产钳或镊子的角度对发展鸡蛋。 使用夹层针针身体墙壁打开一个夹层托盘和角度可以可视化的针脚，使肾脏。肾脏将拥有一个形状特征（头部，躯干/鞍，尾）和色彩，穿插黑色色调的色素沉着（图2）。您还可以看到充满外周血，跑下来的器官结构的中线主动脉。 用细镊子从背侧体壁分离肾脏，使用一对镊子，解除肾为你单独由结缔组织构成的器官。 进一步的活体细胞的研究，如流式细胞仪准备含有1X PBS离心管，轻轻放入所需的车辆肾脏。 2。成年斑马鱼肾脏从一个固定的动物样本的制备及夹层准备了4％paraformaldehyde/1X PBST的解决方案。熬的解决方案，以溶解到溶液中的煤灰，然后冷却到4 ° C的混合物，并添加0.1％二甲。我们曾从使用新鲜的煤灰解决方案，而不是冻结等分组织保存的最成功的。淹没在夹层的成年斑马鱼做出足够的解决方案。 填充足够的固定解决方案淹没在成年斑马鱼解剖一个夹层托盘。我们执行的后续步骤，在显微镜下定位托盘，可放置在化学罩，以尽量减少暴露在固定的气味。 选择解剖年龄在3-6个月之间的成年斑马鱼。 安乐死0.2％Tricaine pH值7.0约5分钟，成菜的鱼，仔细观察，看到的鳃和心脏停止跳动。 用勺子，电梯从Tricaine洗澡的鱼在少量溶液，倾倒的解决方案，轻轻地放在纸巾上的动物。 使用一双解剖剪刀锋利，以消除动物的头，作出削减仅次于鳃鳃盖（图1，路径A）。丢弃在生物危险废物的容器的头，并立即放入动物的煤灰含有夹层托盘。 使用解剖剪刀打开动物的身体，长腹切口，开始从头部和尾部尾鳍的基础（图1，路径B）终止，并保持身体部分淹没在的过程。 用一双解剖镊子/钳取出的动物内脏器官，和生物危险废物。小心勿刷背体壁，因为这是肾脏的位置（图2）。 使用夹层针针打开身体的墙壁，和角度可以可视化的针脚，使肾脏。肾脏将拥有一个形状特征（头，鞍，尾）和色彩，穿插黑色色调的色素沉着（图2）。您还可以看到充满外周血，跑下来的器官结构的中线主动脉。 一夜之间修复的样品，托盘放置在4 ° C当您安排所需的样品做。 第二天，从托盘中取出的煤灰解决方案，并取代1X PBST。 用细镊子仔细分离肾脏背侧体壁，使用一对镊子，解除肾为你单独器官的结缔组织构成。肾组织柔软，柔韧，从固定液DMSO，使它能够在一块的整个肾脏器官解剖。 使用宽孔转移吸管放入离心管的肾。 肾脏，现在可以进一步处理， 进行原位基因表达研究的基础上所需的研究的组织学或整装。 3。代表性的成果： 图解图1中的步骤表明解剖过程。肾脏可根据其形状特征和着色，以及对动物的体腔的背墙解剖位置确定，如图2所示。解剖一个固定的肾脏样品，整个装入原位杂交后，可用于本地化的一个感兴趣的基因的表达，如在图3所示。 图1：程序，使解剖斑马鱼成人肾脏的直接访问 。 （一）安乐死的斑马鱼是解剖一个循序渐进的方式（用数字和箭头表示）给研究者完整的肾脏器官的最简单的访问。腹腔的图片前，（B）和（三）去除腹部器官。 图2：在一个不固定的样本的斑马鱼肾可视以下拆除在腔体内的器官，肾脏出现一个单一的，扁平的器官是通过结缔组织 （一）背体壁贴壁，并已系统化（二）以显示其解剖形状。 图3： 在执行对整个成人肾脏器官的原位杂交装载 。 （一）cadherin17成绩单被发现在成人肾肾肾小管，扩大（一）（B）mafba成绩单本地化近端肾细胞类型，在成人的肾（比较面板整个肾小管一），（ B“ ）mafba表达的放大视图显示成绩单专门的足细胞（P）的细胞的血液过滤器（肾小球）和近曲小管（PCT）的本地化。