使用荧光免疫化学检测爱德华ictaluri（一毛虫）样品
Summary
在这里，我们描述了一个程序，允许标签<em爱德华ictaluri原位</em在斑点叉尾鮰的组织切片<em>斑点叉尾毛虫</em>作为一个小学，和荧光FITC标记抗体作为辅助用单克隆抗体间接免疫组化Ed9。这允许使用荧光显微镜观察细菌的检测。
Abstract
虽然爱德华ictaluri是斑点叉尾鮰毛虫的主要病原体，并已发现了近三十年前 1,2，到目前为止，这些作者的知识，没有方法已发展到允许在原位可视化细菌在组织学切片。
虽然细菌的本地化已在以前的研究使用 3，辐射标记 4平板计数，或发光细菌体内确定，这些研究大多只进行总值器官水平，但有一个例外 6 。此限制的特别关注，是因为大肠杆菌ictaluri有一个复杂的感染周期1,7，和它具有的各种致病因素8,9。 E.复杂的相互作用与它的主机ictaluri是在许多方面类似伤寒沙门氏菌10，这是在同一分类家庭。
在这里，我们描述的一种技术，允许检测细菌用间接免疫组织化学，使用单克隆Ed9抗体安斯沃思等11。
简单地说，一个封闭血清应用于石蜡包埋组织切片，以防止非特定招标。然后，部分孵育与初级抗体：E. ictaluri特异性单克隆抗体Ed9。多余的抗体冲洗，加入FITC标记的抗体。冲洗后，部分安装带有荧光的具体安装介质。
这使得对大肠杆菌的检测ictaluri鮰组织的组织切片原位。
Protocol
Discussion
该协议的细节在组织切片中的鲶鱼病原体爱德华ictaluri原位可视化技术。据我们所知，这是描述的第一个此类协议。
最关键的一步，在我们的经验，是在作为本议定书不足洗涤步骤4.4中所述的抗体冲洗，可能会导致假阳性。
这项技术的结果与解释的主要问题是组织的自体荧光。然而，人们发现，使用三滤，主要是解决问题的非特异性荧光绝?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者希望认识到，发展援助和进行免疫组化米歇尔巴内斯的技术援助以及佩特里 – 汉森博士，博士鳗鱼和Timothy Brown评论。该项目是由美国农业部（USDA）CRIS项目＃MISV – 0801310和密西西比州立大学兽医学院。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Brain Infusion broth | Becton Dickinson | 237200 |
| MS222 | Argent Labs | |
| Whole mouse Serum | Cappel | 55989 |
| Goat anti-mouse FitC | Southern Biotech | 1010-04 |
| Permafluor | Lab Vision | Ta-030-FM |
| Potassium chloride (KCl) | Sigma | P-4504 |
| Triton-X | Sigma-Aldrich | X100-6X500ML |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | 85040C |
| Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma | P-5379 |
| Sodium Bicarbonate (NaHCO3) | Sigma | S-5761 |
| Sodium chloride (NaCal) | Sigma | S-9625 |
| Sodium phosphate dibasic(Na2HPO4) | Sigma | S-9390 |
References
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