تصنيع جهاز ميكروفلويديك للتجزئة سوما الخلية العصبية والمحاوير
Summary
في هذا الفيديو نظهر تقنية الطباعة الحجرية الناعمة مع siloxane polydimethyl (PDMS) التي نستخدمها لfarbricate جهاز ميكروفلويديك لزراعة الخلايا العصبية.
Abstract
في هذا الفيديو ، وندلل على تقنية الطباعة الحجرية الناعمة مع siloxane polydimethyl (PDMS) التي نستخدمها لصنع جهاز ميكروفلويديك لزراعة الخلايا العصبية. سابقا ، كانت منقوشة رقاقة السيليكون مع تصميم للجهاز باستخدام الخلايا العصبية ميكروفلويديك SU – 8 و ضوئيه لإنشاء القالب الرئيسي ، أو ما نشير ببساطة إلى أنه "سيد". المقبل ، ونحن صب بوليمر السليكون PDMS على رأس الرئيسي الذي شفي بعد ذلك عن طريق تسخين PDMS إلى 80 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. ويشكل PDMS العفن السلبية للجهاز. ومن ثم قطع بعناية PDMS ورفعت بعيدا عن الربان. واللكم الثقوب حيث سيتم الخزانات وقلص PDMS الزائدة بعيدا عن الجهاز. ويستخدم النيتروجين لتفجير بعيدا أي حطام الزائدة من الجهاز. عند هذه النقطة الأجهزة هي الآن جاهزة للاستخدام ، ويمكن المستعبدين إما لتغطية زجاج كورنينج رقم 1 مع البلازما التعقيم / نظافة أو يمكن أن تكون ملزمة عكسية على الزجاج تغطي ببساطة عن طريق وضع الجهاز على أعلى من الزجاج غطاء. وغطت الرابطة عكسها الجهاز على الزجاج في شريط فيديو منفصل ويتطلب أولا أن يتم تعقيم الجهاز إما مع الايثانول 70 ٪ أو التعقيم. البلازما علاج يعقم الأجهزة حتى لا مزيد من العلاج الضروري. هو عليه ، ومع ذلك ، من المهم ، عند البلازما معالجة الأجهزة ، إضافة إلى الأجهزة السائل في غضون 10 دقيقة من العلاج البلازما في حين لا تزال الأسطح المائية. الانتظار وقتا أطول من 10 دقائق لإضافة السائل إلى الجهاز يجعل من الصعب على السائل لدخول الجهاز. واضاف على الفور الأجهزة العصبية وعادة ما تكون البلازما محدد لتغطية الزجاج و 0.5 ملغ / مل بولي – L – يسين (PLL) في المخزن الرقم الهيدروجيني بورات 8.5 إلى الجهاز. بعد ما لا يقل عن 3 ساعات مع تفرخ PLL ، يتم غسلها بالماء الأجهزة dH2O ما لا يقل عن 3 مرات على الأقل 15 دقيقة بين كل غسل. المقبل ، يتم إزالة الماء ويضاف الطازجة وسائل الإعلام إلى الجهاز. عند هذه النقطة يكون الجهاز جاهزا للاستخدام. من المهم أن نتذكر في هذه المرحلة أن أبدا إزالة كافة وسائل الإعلام من الجهاز. دائما تترك وسائل الإعلام في القناة الرئيسية.
Protocol
Discussion
في هذا الفيديو أظهرنا كيفية جعل وإعداد جهاز ميكروفلويديك PDMS التي نستخدمها لثقافة فيها الخلايا العصبية والجهاز يسمح لنا بالحصول على جزء نقية محواري مفصولة microgrooves من مقصورة تحتوي على مزيج من الهيئات الخلية ، والتشعبات ، والمحاوير . هذه الأجهزة تسمح للباحث لدراسة آثار العلاجات المختلفة وكذلك توفير منصة لتنفيذ إصابات جسدية على المحاور ومراقبة ما آثار هذه العلاجات وعلى الخلايا العصبية. ويوفر الجهاز أيضا على مستوى من أجل استنبات الخلايا العصبية التي تساعد على تسهيل دراسات النقل. إضافة إلى ذلك ، microgrooves والتي تفصل بين الثقافة المقصورة الخلية من المقصورة محور عصبي ، ويسمح للعزلة fluidic بين القسمين مما يجعل من الممكن لمعالجة جانب واحد من الجهاز دون التأثير على الجانب الآخر من الجهاز مباشرة مع العلاج. هذه الخاصية تسمح للباحث لدراسة تأثيرات مثل نقل الإشارة والنقل التي تنتج عن العلاج.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Reagent | Dow Corning | Sylgard 184 with curing agent Please consult Dow Corning to find a vendor near you | |
| Plasam Cleaner | Tool | Harrick | http://www.harrickplasma.com/ | |
| Neural Basal Media | Reagent | Invitrogen | 21103-049 | Neural Basal Media is obtained by Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents. |
| B27 | Reagent | Invitrogen | 17504-044 | B27 is a proprietary supplement available through Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents. |
| Glutamax | Reagent | Invitrogen | 35050-061 | Glutamax is available through Invitrogen under their Gibco line of celll culture reagents. |
| Cornig No. 1 Cover Glass | cover glass | Corning | Corning No. X2935 244 | Available through Fisher Scientific, Fish Catalog number 12-531D |
| 60 mm Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-757-13A | 60 mm polystyrene sterile petri dishes are used to house the device bound to glass. |
| BD Falcon 50 ml Tube | Tool | BD Falcon | Falcon No. 352098 | Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-49A |
| BD Falcon 15 ml tube | Tool | BD Falcon | Falcon No. 352097 | Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-70C |
| Poly-L-Lysine | Reagent | Sigma | P-1274 | |
| New Item |
References
- Park, J. W., Vahidi, B., , A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. Microfluidic culture platform for neuroscience research.. Nat Protoc. 1, 2128-2136 (2006).
- Taylor, A. M., Blurton-Jones, M., Rhee, S. W., Cribbs, D. H., Cotman, C. W., Jeon, N. L. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nat Methods. 2, 599-605 (2005).
