Пассивный Администрации моноклональных антител против H. capsulatum И другие грибным патогенам
Summary
C57BL / 6 мышей были использованы для изучения патогенеза Нс и обеспечивают лучшую модель. Мы изучаем потенциальных выгод от гуморального иммунитета против этого грибка и порожденных нескольких моноклональных антител [к гистонов H2B и тепла 60kDa шока], что мы тестировали их защитной эффективности после внутрибрюшинного введения.
Abstract
Цель использования данной методики является 1) для продвижения нашего потенциала для защиты лиц с антителами или вакцина для профилактики или лечения гистоплазмоз вызванные грибом Histoplasma capsulatum и 2) рассмотреть вопрос о роли факторов вирулентности, как мишени для терапии. Для создания моноклональных антител, мышей сделаны прививки, иммунные реакции оценивались с помощью твердофазного ИФА система, разработанная в нашей лаборатории, и лучший ответчик мышей, выбранных для изоляции спленоцитов для слияния с гибридомных клеток. C57BL / 6 мышей были широко использованы для изучения H. capsulatum патогенеза и обеспечить лучшую модель для получения данных, необходимых. Для того чтобы оценить роль моноклональных антител к инфекции, мышей внутрибрюшинно вводили либо МКА к H. capsulatum или изотипа контрольной МКА, а затем зараженные или внутривенно (IV), внутрибрюшинно (IP), или интраназально (в) маршруты. В научной литературе, эффективность моноклональных антител для грибковых инфекций у мышей зависит от смертности, как конечная точка, в сочетании с колонией Лазэр единиц (КОЕ) оценки на более ранних моментов времени. Выживание (время до смерти) исследования необходимы, поскольку они лучше всего представляют болезни человека. Таким образом, эффективность нашего вмешательства не будет адекватно быть установлено без кривых выживаемости. Это также верно для установления эффективности вакцины или тестирования мутантов для вирулентности. С гистоплазмоз, мышей часто идут от того, энергичными с мертвыми в течение нескольких часов. Мощностью вмешательства, например, администрация МКА может сначала защитить животное от болезни, но болезнь может рецидив, который не был бы реализован в короткие экспериментов КОЕ. В дополнение к выживанию и грибковых анализов бремя, мы исследуем воспалительный ответ на инфекцию (гистология, сотовые найма, цитокинов ответов). Для выживания / время, чтобы смерть экспериментов мышей инфицированных и мониторинг по крайней мере два раза в день за признаками заболеваемости. Для оценки грибковых бремени, гистопатология, и цитокинового ответа, мышей эвтаназии в разное время после заражения. Эксперименты на животных проводятся в соответствии с руководящими принципами, Института защиты животных Исследования Альберт Эйнштейн медицинский колледж.
Protocol
Discussion
Протокол, представленные здесь, показывает, что МКА к H. capsulatum может изменить ход экспериментальной мышиной гистоплазмоз. МАТ к поверхности клеток антигенов возбудителей может изменить сложную динамику, которые происходят во взаимодействии между хозяином и патогеном. Это исследо…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Material | Company |
|---|---|
| Biological safety cabinet (BSL2) | |
| 15 mL conical tubes | Falcon, BD |
| HAM F-12 medium | Gibco |
| 37°C shaker | |
| Vortex | |
| 50 mL conical tubes | Falcon, BD |
| 26G1/2 needle | BD |
| 10 mL syringe | BD |
| 250 mL flasks | |
| FPLC (Fast protein liquid chromatography) system | GE Helthcare |
| ELISA reader | BioTek |
| Anesthesia (ketamine and Xylazine) | |
| Column stands | |
| Nylon string | |
| Heat lamp | |
| 70μm cell strainers | Falcon, BD |
| BHI agar plates | Gibco |
References
- Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide. J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).
- Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77. , 1357-1367 (2009).
- Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum. PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).
- Nosanchuk, J. D. Protective antibodies and endemic dimorphic fungi. Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).
- Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &, G. S., Casadevall, A. Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum. J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).
- Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum. J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).
- Smith, W. Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics. Lab Anim. 27, 30-39 (1993).
