Amministrazione passivo di anticorpi monoclonali contro H. capsulatum E altri patogeni fungini
Summary
Topi C57BL / 6 sono stati utilizzati per studiare la patogenesi Hc e fornire il modello migliore. Stiamo esplorando i potenziali benefici dell'immunità umorale contro questo fungo e ha generato anticorpi monoclonali diversi [di istone H2B e 60kDa Heat Shock Protein] che abbiamo testato per la loro efficacia protettiva dopo la somministrazione intraperitoneale.
Abstract
Lo scopo l'uso di questa metodologia è 1) per avanzare la nostra capacità di proteggere le persone con anticorpi o vaccini per prevenire o curare l'istoplasmosi causata dal fungo Histoplasma capsulatum e 2) per esaminare il ruolo dei fattori di virulenza come bersaglio per la terapia. Per generare anticorpi monoclonali, i topi sono immunizzati, le risposte immunitarie sono valutati mediante un solido sistema di fase ELISA sviluppato nel nostro laboratorio, e la migliore topi risponditore vengono selezionati per l'isolamento di splenociti per la fusione con cellule ibridomi. Topi C57BL / 6 sono stati ampiamente utilizzati per studiare H. patogenesi capsulatum e fornire il miglior modello per ottenere i dati richiesti. Al fine di valutare il ruolo del mAbs in infezione, i topi sono intraperitoneale somministrato sia con mAb a H. capsulatum o isotipo controllo di pari mAb e poi infettato da entrambi per via endovenosa (ev), intraperitoneale (ip), o intranasale (in) percorsi. Nella letteratura scientifica, l'efficacia di anticorpi monoclonali per le infezioni fungine nei topi si basa sulla mortalità come un punto finale, in collaborazione con le unità Formin colonia (CFU) valutazioni in momenti precedenti. Sopravvivenza (tempo al decesso) studi sono necessari in quanto rappresentano al meglio la malattia umana. Quindi, l'efficacia del nostro intervento non sarebbe adeguatamente essere stabilito senza curve di sopravvivenza. Questo vale anche per stabilire l'efficacia del vaccino o test di mutanti per la virulenza. Con istoplasmosi, i topi vanno spesso ad essere energici per morto diverse ore. La capacità di un intervento, come la somministrazione di un mAb inizialmente può proteggere un animale dalla malattia, ma la malattia può ricaduta che non potrebbero essere realizzati in breve esperimenti CFU. Oltre a saggi di sopravvivenza e carica fungina, esaminiamo la risposta infiammatoria all'infezione (istologia, reclutamento cellulare, le risposte citochine). Per la sopravvivenza / ora per esperimenti di morte, i topi sono infettati e controllati almeno due volte al giorno per i segni di morbilità. Per valutare la carica fungina, istopatologia, e le risposte delle citochine, i topi sono l'eutanasia in vari momenti dopo l'infezione. Gli esperimenti sugli animali vengono eseguiti secondo le linee guida dell'Istituto per gli studi sugli animali dell'Albert Einstein College of Medicine.
Protocol
Discussion
Il protocollo presentato qui dimostra che mAb di H. capsulatum può modificare il corso di sperimentale istoplasmosi murini. MAbs di antigeni di superficie di patogeni possono modificare le complesse dinamiche che si verificano durante l'interazione tra un host e un agente patogeno. Questo studio stabilisce che mAbs mediare protezione in un modello murino di istoplasmosi letale quando iniettato per via intraperitoneale, e suggerisce proteine candidate per lo sviluppo del vaccino, come H2B, antigene M …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Material | Company |
|---|---|
| Biological safety cabinet (BSL2) | |
| 15 mL conical tubes | Falcon, BD |
| HAM F-12 medium | Gibco |
| 37°C shaker | |
| Vortex | |
| 50 mL conical tubes | Falcon, BD |
| 26G1/2 needle | BD |
| 10 mL syringe | BD |
| 250 mL flasks | |
| FPLC (Fast protein liquid chromatography) system | GE Helthcare |
| ELISA reader | BioTek |
| Anesthesia (ketamine and Xylazine) | |
| Column stands | |
| Nylon string | |
| Heat lamp | |
| 70μm cell strainers | Falcon, BD |
| BHI agar plates | Gibco |
References
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