מינהל פסיבי של נוגדנים חד שבטיים נגד ח capsulatum ואחרים פתוגנים פטרייתיים
Summary
C57BL עכברים / 6 שימשו ללמוד בפתוגנזה HC ולספק את המודל הטוב ביותר. אנחנו בוחנים את היתרונות הפוטנציאליים של חסינות הלחות נגד פטריות זה שנוצר מבז מספר [כדי H2B היסטון ואת הלם חום 60kDa חלבון] כי בדקנו את יעילות ההגנה שלהם לאחר מתן intraperitoneal.
Abstract
מטרת השימוש של מתודולוגיה זו היא 1) כדי לקדם את היכולת שלנו להגן על אנשים עם נוגדנים או חיסון למניעת או לטיפול histoplasmosis נגרמת על ידי פטרייה capsulatum Histoplasma ו 2) לבחון את התפקיד של גורמים ארסיות כיעד לטיפול. כדי ליצור מבז, עכברים הם שחוסנו, תגובות החיסון מוערכים באמצעות בשלב מוצק ELISA המערכת שפותחה במעבדה שלנו, את העכברים הטובים ביותר המגיב נבחרים הבידוד של splenocytes היתוך עם תאים hybridoma. C57BL עכברים / 6 נעשה שימוש נרחב ללמוד H. בפתוגנזה capsulatum ולספק את המודל הטוב ביותר להשגת הנתונים הדרושים. על מנת להעריך את התפקיד של מבז זיהום, עכברים הם intraperitoneally מנוהל גם עם מב ח ל capsulatum או אלוטיפ בהתאמה מלאה מב ו נגוע אז או תוך ורידי (iv), intraperitoneal (IP), או intranasal (ב) מסלולים. בספרות המדעית, היעילות של מבז עבור זיהומים פטרייתיים בעכברים מסתמך על תמותה כנקודת סיום, בשיתוף עם formin יחידות המושבה (CFU) הערכות בנקודות זמן קודמות. (זמן מותו) מחקרים הישרדות נחוצים כמו שהם מייצגים בצורה הטובה ביותר מחלות אנושיות. לכן, יעילותה של התערבות שלנו לא מספקת תוקם ללא עקומות ההישרדות. הדבר נכון גם להקמת היעילות של חיסון או בדיקה של מוטנטים עבור ארסיות. עם histoplasmosis, העכברים לעתים קרובות ללכת מלהיות אנרגטית מת על כמה שעות. הקיבולת של התערבות כגון ניהול של MAB עשוי בתחילה להגן מפני מחלות בעלי חיים, אך המחלה יכולה להישנות אשר לא ימומש בקיצור ניסויים CFU. בנוסף הישרדות מבחני עומס פטרייתי, אנו בוחנים את תגובות דלקתיות לזיהום (היסטולוגיה, גיוס הסלולר, תגובות ציטוקינים). עבור ההישרדות / שעה כדי ניסויים מוות, עכברים נגועים ומנוטרים לפחות פעמיים ביום סימנים של תחלואה. על מנת להעריך את הנטל פטרייתי, histopathology, ותגובות ציטוקינים, בעכברים מורדמים בזמנים שונים לאחר ההדבקה. ניסויים בבעלי חיים מבוצעות על פי ההנחיות של המכון ללימודי החיות של אלברט איינשטיין לרפואה.
Protocol
Discussion
פרוטוקול המוצג כאן מוכיח כי MAB של אל ח capsulatum יכול לשנות את מהלך histoplasmosis Murine ניסיוני. מבז אל פני השטח אנטיגנים התא של פתוגנים יכול לשנות את הדינמיקה מורכבים המתרחשים במהלך משחק הגומלין בין המארחת לבין הפתוגן. מחקר זה קובע כי מבז לתווך הגנה במודל Murine של histoplasmosis קטלנ…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Material | Company |
|---|---|
| Biological safety cabinet (BSL2) | |
| 15 mL conical tubes | Falcon, BD |
| HAM F-12 medium | Gibco |
| 37°C shaker | |
| Vortex | |
| 50 mL conical tubes | Falcon, BD |
| 26G1/2 needle | BD |
| 10 mL syringe | BD |
| 250 mL flasks | |
| FPLC (Fast protein liquid chromatography) system | GE Helthcare |
| ELISA reader | BioTek |
| Anesthesia (ketamine and Xylazine) | |
| Column stands | |
| Nylon string | |
| Heat lamp | |
| 70μm cell strainers | Falcon, BD |
| BHI agar plates | Gibco |
References
- Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide. J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).
- Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77. , 1357-1367 (2009).
- Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum. PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).
- Nosanchuk, J. D. Protective antibodies and endemic dimorphic fungi. Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).
- Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &, G. S., Casadevall, A. Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum. J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).
- Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum. J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).
- Smith, W. Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics. Lab Anim. 27, 30-39 (1993).
