الإدارة السلبي من الاجسام المضادة ضد H. المغمدة مسببات الأمراض الفطرية وآخرون
Summary
وقد استخدمت C57BL / 6 الفئران لدراسة HC المرضية وتقديم النموذج الأفضل. نحن استكشاف الفوائد المحتملة للمناعة ضد هذا الفطر الخلطية ولدت MABS عدة [لH2B هيستون والصدمة الحرارية من البروتين 60kDa] أننا لاختبار فعاليتها وقائية بعد تعاطيه في التجويف الجنبي.
Abstract
الغرض من استخدام هذه المنهجية هو 1) لتعزيز قدرتنا على حماية الأفراد مع الأجسام المضادة أو لقاح لمنع أو علاج المنسجات التي يسببها فطر النوسجة المغمدة و 2) لدراسة دور العوامل الفوعة هدفا للعلاج. لتوليد MABS ، وتحصين الفئران ، وتقييم الاستجابات المناعية باستخدام نظام متين ELISA المرحلة المتقدمة في المختبر لدينا ، ويتم اختيار أفضل الفئران المستجيب لعزل splenocytes للاندماج مع خلايا ورم هجين. وقد C57BL / 6 الفئران المستخدمة على نطاق واسع لدراسة H. المغمدة المرضية وتقديم أفضل نموذج للحصول على البيانات المطلوبة. من أجل تقييم دور MABS في العدوى ، والفئران هي intraperitoneally تدار إما مع خريطة موقع لحاء المغمدة isotype المتطابقة أو خريطة موقع السيطرة وأصاب بعد ذلك إما عن طريق الوريد (IV) ، والطرق (في) داخل الصفاق (IP) ، أو الأنف. في الأدبيات العلمية ، وفعالية MABS للالتهابات فطرية في الفئران تعتمد على وفيات ونقطة نهاية ، بالاشتراك مع وحدات formin مستعمرة (CFU) المقررة في نقاط وقت سابق. البقاء على قيد الحياة (وقت الوفاة) دراسات ضرورية لأنها تمثل أفضل الأمراض التي تصيب البشر. وبالتالي ، فإن فعالية تدخلنا ليس كافيا أن تنشأ من دون منحنيات البقاء على قيد الحياة. هذا ينطبق أيضا على إقامة فعالية لقاح أو اختبار الفوعة عن المسوخ. مع المنسجات ، وغالبا ما تذهب من الفئران التي يجري نشطة لطريق مسدود بسبب عدة ساعات. قد قدرة تدخل مثل إدارة حماية من خريطة موقع مبدئيا على الحيوان من المرض ، ولكن يمكن انتكاس المرض الذي لن يتحقق في التجارب CFU قصيرة. بالإضافة إلى بقاء والمقايسات عبء الفطرية وندرس الاستجابات الالتهابية للعدوى (الأنسجة ، والتوظيف الخلوية ، والاستجابات خلوى). من أجل البقاء / زمن لتجارب الموت ، وإصابة الفئران ورصد ما لا يقل عن مرتين يوميا بحثا عن علامات لاعتلال. لتقييم عبء الفطرية والأنسجة ، والاستجابات خلوى ، يصرح باستخدامها الفئران في أوقات مختلفة بعد العدوى. وتجرى التجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية لمعهد الدراسات الحيوانية في كلية ألبرت اينشتاين للطب.
Protocol
Discussion
بروتوكول المعروضة هنا يدل على أن خريطة موقع لحاء يمكن المغمدة تعديل مسار المنسجات الفئران المختبرية. يمكن MABS لمستضدات سطح الخلية من مسببات تعديل الديناميكيات المعقدة التي تحدث خلال التفاعل بين المضيف والممرض ملف. هذه الدراسة على أن حماية MABS التوسط في نموذ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Material | Company |
|---|---|
| Biological safety cabinet (BSL2) | |
| 15 mL conical tubes | Falcon, BD |
| HAM F-12 medium | Gibco |
| 37°C shaker | |
| Vortex | |
| 50 mL conical tubes | Falcon, BD |
| 26G1/2 needle | BD |
| 10 mL syringe | BD |
| 250 mL flasks | |
| FPLC (Fast protein liquid chromatography) system | GE Helthcare |
| ELISA reader | BioTek |
| Anesthesia (ketamine and Xylazine) | |
| Column stands | |
| Nylon string | |
| Heat lamp | |
| 70μm cell strainers | Falcon, BD |
| BHI agar plates | Gibco |
References
- Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide. J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).
- Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77. , 1357-1367 (2009).
- Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum. PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).
- Nosanchuk, J. D. Protective antibodies and endemic dimorphic fungi. Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).
- Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &, G. S., Casadevall, A. Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum. J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).
- Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum. J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).
- Smith, W. Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics. Lab Anim. 27, 30-39 (1993).
