Proteomic 분석을위한 인적 유리 바디 요소의 해부
Summary
이 동영상은 사후의 눈에 인간의 유리 신체의 다양한 반투명 구조를 차별하고 해부를위한 효과적인 기법을 보여줍니다.
Abstract
유리체는 안구와 overlies 망막의 내부를 채우고 광학 명확 collagenous 세포외 기질이다. 유리체 substructures와 망막 사이에 1,2 비정상적인 상호 작용은 망막 눈물과 분리, 황반 주름, 황반 구멍 등 여러 vitreoretinal 질환, 기초 연령 관련 황반 변성, vitreomacular 트랙션, proliferative vitreoretinopathy, proliferative 당뇨성 망막 병증의 및 상속 vitreoretinopathies. 1,2 유리체 substructures의 분자 구성을 알 수 없습니다. 유리체 시체가 제한된 수술 액세스할 수있는 투명하기 때문에, 그것은 분자 수준에서 그 substructures을 공부하기 어려운되었습니다. 우리는 proteomic 및 생화 학적 분석을 위해 이러한 조직을 분리하여 보존하는 방법을 개발했습니다. 이 실험 동영상 해부 기술은 유리 기지 앞쪽에의 hyaloid, 유리 코어, 그리고 사후에 인간의 눈에서 유리 피질을 분리하는 방법을 보여줍니다. 각 유리체 구성 요소 중 하나는 차원 SDS – PAGE 분석은 우리의 해부 기술은 인간의 유리 본체의 각 기초 공사에 해당하는 사 고유의 단백질 프로파일 결과 것으로 나타났다. differentially들에게만 단백질의 식별이 후보 분자는 다양한 vitreoretinal 질병을 기본 공개합니다.
Protocol
Discussion
유리체베이스, 코어, 피질, 그리고 앞쪽에 hyaloid : 유리 몸은 누구의 분자 구성이 저조한 특히 substructures의 수준에서 이해 반투명 젤입니다. 유리체 핵심은 당뇨 망막 병증과 같은 질환과 연관된되었습니다 콘드로이틴 황산염의 proteoglycans, heparan의 황산염의 proteoglycans와 유리체 핵심에 hyaluronan. 1,2 단백질 생체와 함께, 콜라겐으로 합성한 II, V, IX, 그리고 XI가 포함되어 있습니다. 3-5 어떻게 이러한 단백질은 differentially substructures 각 표현하고 있으며, 많은 경우에 특정 단백질 신원은 알려져 있지 않습니다. 이러한 내용은 특정 vitreoretinal 질환과 관련된 단백질의 기원에 대한 통찰력을 제공하고 대상 미래 요법을하는 데 도움이 될 수 있습니다. 조직의 절개에 대한 최적의 해부 간격이 결정되지 않았지만, 단백질이 저하 하류 실험에 영향을 미칠 수 있습니다. 예를 들어, immunohistochemistry 12 시간 사후 눈에 영향과 일부 특정 효소 활동 (관찰되지 않은) 몇 시간 이내에 줄어들 수 있습니다. 이 연구의 모든 조직은 proteomics의 analsyis을위한 단백질 표현이나 적합성에 큰 변화없이 사망 2, 8 시간 사이에 수집되었다. 보존의 액체 질소 동결 방법이 LC-MS/MS 다른 조직에서 증명되었습니다 정착액 상호 연결로 인한 단백질 구조의 작은 변화를 방지하기 위해 고정 이상 선택합니다. 6 Proteomic 연구 정확하게하는 능력에 따라 달라집니다 본 동영상 실험에서 보여주 유리체의 다른 구획을 해부하다. 우리는 1 차원 SDS – PAGE를 사용하여 절개 기술을 입증했습니다. 우리의 결과는 제안으로, differentially 다양한 유리 바디 substructures에 단백질이 표현됩니다. 이러한 단백질을 확인하는 것이 유리 compartmentalization의 자세한 이해를 제공합니다.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
기금은 시력을 위해 전투에 의해 제공되었다. 조직은 아이오와 라이온스 안구 은행에서 얻은되었습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number |
| 0.12 forceps | Storz Ophthalmics | E1502 |
| 5-cc syringe | Becton-Dickinson | 309603 |
| Straight Dressing Forceps With Serrations | Storz Ophthalmics | E1400 |
| 23 gauge needle | Becton-Dickinson | 305145 |
| Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 |
| Castroviejo angled corneal scissors | Storz Ophthalmics | E3223 |
| Vannas Curved Capsulotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3387 |
| Weck-Cel surgical spears | Medtronic | 0008680 |
| Westcott Curved Tenotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3320 |
References
- Bishop, P. N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Prog Retin Eye Res. 19, 323-344 (2000).
- Sebag, J. Molecular biology of pharmacologic vitreolysis. Trans Am Ophthalmol Soc. 103, 473-494 (2005).
- Yoshimura, T. Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases. PLoS One. 4, e8158-e8158 (2009).
- Gao, B. B., Chen, X., Timothy, N., Aiello, L. P., Feener, E. P. Characterization of the vitreous proteome in diabetes without diabetic retinopathy and diabetes with proliferative diabetic retinopathy. J Proteome Res. 7, 2516-2525 (2008).
- Izuta, H. Extracellular SOD and VEGF are increased in vitreous bodies from proliferative diabetic retinopathy patients. Mol Vis. 15, 2663-2672 (2009).
- Azimzadeh, O. Formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) proteome analysis using gel-free and gel-based proteomics. J Proteome Res. 9, 4710-4720 (2010).
