Synapses Quantifier: un dosage à base d'immunocytochimie Quantifier Nombre Synapse

L'un des objectifs les plus importants en neurosciences est de comprendre les signaux moléculaires qui instruisent premiers stades de la formation des synapses. Comme tel, il est devenu impératif de développer des approches pour objectif de quantifier les changements de la connectivité synaptique. A partir de la fixation de l'échantillon, ce protocole décrit comment quantifier le numéro de synapses neuronales dans la culture à la fois dissociées et dans les sections du cerveau en utilisant l'immunocytochimie. En utilisant des anticorps spécifiques du compartiment, nous appelons les terminaux présynaptiques ainsi que des sites de spécialisation post-synaptiques. Nous définissons les synapses comme des points de colocalisation entre les signaux générés par ces marqueurs. Le nombre de ces colocalizations est quantifiée à l'aide d'un bouchon dans puncta Analyzer (écrit par Bary Wark, disponible sur demande, c.eroglu @ cellbio.duke.edu) sous la plateforme logiciel ImageJ analyse. Le dosage de la synapse décrite dans ce protocole peut être appliqué à toute la préparation du tissu neuronal ou d'une culture pour laquelle vous avez sélective des marqueurs pré-et post-synaptiques. Ce test synapse est un outil précieux qui peut être largement utilisée dans l'étude du développement synaptique.