Drosophila 애벌레 Segmental Axons 이내 시냅틱 Vesicles의 생체내 시각화에
Summary
이 프로토콜은의 라이브 절개를 설명<em> Drosophila</em영상의 목적은 미세 소관 트랙에 GFP 태그 axonal vesicles의 움직임에 대해> 애벌레.
Abstract
axonal 수송의 메커니즘을 Elucidating하면 장거리 수송의 결함은 다른 신경 질환에 미치는 영향에 대해 결정에서 매우 중요하다고 표시했습니다. 이 필수 과정에서 결함의 연결 기능 및 개발에 해로운 영향을 미칠 수 있습니다. 우리는을 폭로하기 위해 설계되었습니다 해부 프로토콜을 개발했습니다<em> Drosophila</em실시간 axonal 교통을 보려면> 애벌레 segmental 신경. 우리는 허드와 애벌레 segmental 신경의 immunolocalizatin 사용 색스턴 (1996)에 의해 출판 하나에서 라이브 영상이 프로토콜을 적응있다. 주의 해부 적절한 버퍼 조건 해부 애벌레의 수명을 최대화를 위해 중요하다. 제대로 완료되면, 해부 유충이 생리 조건 하에서 2~3시간에 대한 강력한 소포 전송을 보여주었다. 우리는 UAS – GAL4 방법을 사용<sup> 1</sup> 표현하는 GFP – 태그의 연결을 다른 GAL4 드라이버를 사용하여 애벌레 segmental 신경에서 하나의 축삭 또는 여러 axons 이내 APP 또는 synaptotagmin의 vesicles 있습니다. 기타 찬란 태그 마커 예를 들어 mitochrondria (MitoTracker) 또는 lysosomes (LysoTracker)는 또한보기 전에 애벌레에 적용할 수 있습니다. GFP – 소포 운동과 입자의 움직임은 별도의 파장을 사용하여 동시에 볼 수 있습니다.
Protocol
Discussion
Drosophila 애벌레 segmental 신경 사이 시냅스 소포 수송의 생체내 이미징에서 axonal 교통의 메커니즘을 연구를위한 강력한 도구입니다. 우리는 이전 반복의 확장은 소포 수송 3 역학에 미치는 영향 명료하게하다 확대 polyQ 반복을 표현 애벌레 신경 내에 전송 역학을 평가하기 위해이 프로토콜을 사용하고 있습니다. 이 프로토콜을 사용하는 것은 소포 운동의 속도는 kymograph에 비디…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG는 버팔로의 뉴욕 주립 대학에서와 존 R. Oishei 재단 기금에 의해 지원됩니다.
MK는 UB의 CURCA하여 학생 연구 수상에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 Pair Micro Dissection Scissors | Fine Scientific | Spring scissors – 6mm blade. 0.125 mm tip diameter | ||
| 2 Pair Forceps | Fischer Scientific | Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps | ||
| Box of Dissection Pins | Fine Scientific | Minutien Pins 0.1mm diameter |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Génétique. 144, 1075-1085 (1996).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40, 25-40 (2003).
