3 애벌레 Segmental 신경의 시각화 차 Instar Drosophila 애벌레 준비
Summary
Drosophila melanogaster의 애벌레가 애벌레 segmental 신경 이내 axonal 수송의 메커니즘을 조사하기 위해 이상적인 모델 시스템을 제공합니다. 이 절차를 사용하여 다양한 변이를 갖고 제 3 instar의 애벌레는 야생 타입 애벌레 비교할 수 있습니다.
Abstract
Drosophila melanogaster 특히 때문에 편리 유전 완전 합성 게놈의 신경 계통의 발달과 기능을 연구를위한 강력한 모델 시스템으로 대두되고 있습니다. 또한, 애벌레 신경 시스템은 애벌레 segmental 신경이 신체의 길이를 따라 결말 두뇌 및 신경 터미널 내에있는 자신의 세포 기관과 axons의 번들을 포함하는 등 axonal 교통의 메커니즘을 연구하는 이상적인 모델 시스템입니다. 여기 애벌레 segmental 신경 사이 시냅스 소포 단백질의 시각화를위한 절차를 설명합니다. 제대로하면, 신경 시스템의 모든 구성 요소는 이러한 근육과 NMJs 등 관련 조직과 함께, 손상 손상 및 시각 준비가 남아있다. 다양한 변이를 갖고 제 3 instar의 애벌레가 해부되고, 고정 시냅스 소포 항체와 incubated, 시각 및 야생 입력 유충에 비해. 이 절차는 쉽게 애벌레 segmental 신경 내에서 볼 수 있습니다 단백질의 다양한 배포판에 여러 다른 시냅스의 연결 또는 항체 및 변경 적용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
Drosophila 애벌레 segmental 신경 axonal 교통 메커니즘을 연구하기위한 강력한 시스템입니다. 3 차 instar 애벌레의 절개가 올바르게 수행하는 경우, 등 근육과 NMJs 같은 CNS, PNS, 및 관련 조직, 모든 구성 요소는 하나의 유충 이내에 검사를하실 수 있습니다. 우리는 허드와 색스턴 (1996)에 의해 출판 하나에서이 프로토콜을 적응있다. 이 프로토콜은 다른 항체의 연결을 테스트하는 적응 될 수 …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG는 버팔로의 뉴욕 주립 대학에서와 존 R. Oishei 재단 기금에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11252-20 | ||
| Minutien Pins, Stainless Steel | Fine Science Tools, Inc. | 26002-10 | ||
| Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors | Fisher Scientific | 50822236 | ||
| Vectashield, Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 | ||
| Sylgard 184 Silicone elastomer | Dow Corning Corporation | 4026148 | ||
| formaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | ||
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
References
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Génétique. 144 (3), 1075-1085 (1996).
- Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).
