アダルトゼブラフィッシュへの腹腔内注射

空腹時、ひょう量、麻酔、注射、および回復：腹腔内注射は、5つのステップが含まれます。各ステップの成功を確保することができるベストプラクティスがあります。成功は、健康な魚の患者だけでなく、良い実験結果が含まれています。

空腹時：24時間の高速は、腸の電球を空にする必要があります。このような行為は、魚獣医文献（例えば、ブラウン1993）から取得されます。追加の空腹時の考慮事項について以下に説明します。

長期的な断食：私たちは、72時間高速で注入する前にベースラインレベルに血糖を減少させるために必要であることを発見した（イームズら 、2010）。我々はまた、グルコースの研究のために魚が適切に絶食していることを保証するために必要とされるいくつかの手順があることを発見した。クリーンタンク（底のない破片）で始まります。タンクは明らかに"断食"というラベル、オフライン状態にしてください、そして場所に熱狂的な魚の医療従事者はそれらを給紙されない場所。タンクの外部環境を評価し、ストレスは血糖を上げるために知られているように、障害から強調されてから魚をしないように対策を講じる（チャビンとヤング、1970;グロッフら 、1999。）。例えば、我々は無線は魚のタンクを持っていたベンチに毎日運営された断食実験していた。我々は、血糖値が異常に高いことが判明し、魚が振動によって強調されたと結論づけた。別のストレッサーは過密です。魚は良い魚飼育慣行に準拠して密度に維持する必要があります。推奨事項については、ブランドらを参照してください。 （2002）とウェスターフィールド（1995）。我々は、9リットルタンク（そのボリュームの一部を占めてビー玉の3層で）10〜12魚の密度で私たちの魚を絶食良い結果を得ています。男女を分離することがストレスの原因となりますので、高速の中に混在性別人口を維持することをお勧めします。これは、卵を配置することができることを意味し、そして卵は、それらが食べされないように隔離する必要があります。卵を隔離するための簡単​​な方法は、大理石の2-3層でタンクの底をカバーするものである。水質は、卵や廃棄物を除去することによって、毎日水槽の水の約10-15％を、置き換えることにより維持される必要があります。サイフォン、卵や廃棄物を除去するに適しています。

ひょう量：麻酔ではない魚を計量するとき、注意が正確な計量を確保するために、ビーカーにネットから水の移動を最小限に抑えるよう注意が必要です。ネットが（魚付き）ペーパータオルにブロットされている場合、余分な水分の大部分は除去することができ、重量を正確に測定することができる。それは前の計量に魚を麻酔する方が簡単かもしれませんが、私たちは一日に二度魚を麻酔の可能性のある影響をテストしていません。我々は、それが麻酔され、ゆっくりと乾燥したブロットした後、魚を再び秤量しネッティング/ブロッティング法を持つ最初の魚を秤​​量し、ことによって私たちの技術をテストしている。我々は、メソッド間の体重に有意差は認められなかった（P = 0.7927、t -検定）。さらに、我々は、単にとすぐに（なしブロッティング）網掛けされているビーカーに魚を移すと比較して、このネッティング/ブロッティング法、影響を受けた血糖かどうかを試験した。我々は2つ​​の転送方法との間の血糖値に有意差は認められなかった（P = 0.2241、t -検定）。

麻酔：化学麻酔は、多くの研究に適している。多くの麻酔薬は、（tricaine/MS-222（ブラウン、1993）を含む）、血糖値を上げるので、ここでは、代替手段として、冷たい水の麻酔を実証した。以前の研究では、私たちは冷たい水が（イームズら 、2010）ゼブラフィッシュで血糖値を上昇させないことを決定した。
冷たい水の麻酔の場合は、温度を徐々に減少させるべきである。減少率は小さい魚が大きな魚よりも高速で行くと、魚の大きさに依存するようです。注入に続いて、魚は麻酔薬（下記参照）から、あまりにもゆっくりと回復していることが観察される場合があります。開始温度が低すぎる場合、または温度があまりにも急激に減少しているときにどちらかこれが発生する可能性があります。開始温度は、水に入ると魚が曲がる場合横方向に低すぎる。開始温度が正しければ、魚は最初にそのバランスを維持します。それは、水平の位置にその胸ひれを回して息をのむ、および迅速な蓋の動きを持つことになります。一般的に、それは泳ぐだろう。温度が減少すると、動きが減少し、魚は平衡を失うことになる。魚が反応することなく処理できるときに麻酔の外科平面に到達する。手術の麻酔下で魚を維持するために、あなたの指は、寒くなるので、魚を処理する前に水でそれらを維持する必要があります。スポンジは、魚を麻酔に使用される水と同じ温度で低温に保たれている必要があります。 sufficieである水とスポンジを飽和することが重要です。魚はその上に配置されると、麻酔を維持するためにntly寒い。

注射：前着手注射に、あなたが体壁の厚さの感覚を得るために少なくとも1つの魚を解剖したい場合があります。これは、針が腹腔を入力するように挿入する必要がどこまで判断することができます。さらに、針を挿入するように、針が腹腔内に入ると体壁は、"与える"感じることができる。注入中に、患者を満足させるための手順を実行します。スポンジを注入中に復活するから魚を防ぐために、正しい温度冷たい水で飽和されていることを確認します。よく飽和と柔らかいスポンジは、スケールと、皮膚の被覆粘液へのダメージを最小にするために重要です。よく飽和スポンジはエラが通気保つためにも重要です。我々は、非常に材料の下に、下記のフォームスポンジをお勧めします。最後に、一度魚が麻酔か、魚が下になる時間を最小限に抑えるために迅速に働く。

回復：魚は暖かい水槽の水に入ると実質的に麻酔から回復する必要があります。魚はえらに向かって静かに渦巻く水の回復を高速化するために、すぐに水泳を開始していない場合。回復が遅い場合は、その後、魚が余りにすぐに下に行き、あなたが適切に麻酔の手順を調整する必要があります。緩やかな回復の可能性のある原因は、麻酔下で説明されています。