حقن داخل الصفاق الى اسماك الزرد الكبار
Summary
حقن داخل الصفاق نظهر في الزرد الكبار. نحن نستخدم 10 microsyringe NanoFil ميكرولتر التي تسيطر عليها وحدة تحكم Micro4 UltraMicroPump والثالث. هذه التظاهرة يتضمن استخدام الماء البارد كمخدر.
Abstract
إن الطريقة المناسبة لمعالجة كيميائيا الزرد هي لتعريف كاشف في خزان المياه ، حيث سيتم تناوله من الأسماك. ومع ذلك ، هذا الأسلوب يجعل من الصعب معرفة كم هو كاشف أو استيعابها في تناول الأسماك. قد يكون هناك بعض الأسئلة التجريبية ، وبخاصة تلك المتعلقة بدراسات التمثيل الغذائي ، من خلال تقديم الأفضل تناول كمية محددة لكل الأسماك ، وعلى أساس الوزن. هنا نقدم أسلوبا للحقن (IP) داخل الصفاق في الزرد الكبار. الحقن في تجويف البطن ، والخلفي للحزام الحوض. ويتم تكييف هذا الإجراء من الأساليب المستخدمة للحصول على أكبر البيطرية الأسماك. أنها آمنة ، كما لاحظنا وفيات صفر. بالإضافة إلى ذلك ، شهدنا نزيف في موقع الحقن في 5 فقط من أصل 127 من الحقن ، وفي كل تلك الحالات كان ينزف ودائم وجيزة عدة ثوان ، وكمية الدم المفقود كان صغيرا. مع نجاح هذا الإجراء يتطلب التعامل مع طيف من الأسماك من خلال خطوات عدة منها الصوم ، وزنها ، والتخدير ، والحقن ، والانتعاش. الاحتياطات اللازمة للحد من التوتر في جميع أنحاء الداخلي. احتياطات لدينا تشمل استخدام وحدة تخزين صغيرة وحقن ابرة 35G. نستخدم كورتلاند محلول الملح والسيارة ، التي هي متوازنة osmotically للأسماك المياه العذبة. المحافظة على تهوية الخياشيم أثناء إجراء الحقن عن طريق جلب أول طائرة الأسماك في التخدير الجراحي ، والذي يسمح حركات الوصاد بطيئة ، والثانية ، وذلك بعقد السمك في حوض داخل اسفنجة مشبعة بالماء خلال الحقن نفسها. نحن لشرح فائدة الحقن الملكية الفكرية عن طريق حقن الجلوكوز ورصد ارتفاع في مستوى السكر في الدم وعودتها إلى وضعها الطبيعي لاحقا. كما هو معروف لزيادة الضغط السكر في الدم في الأسماك مكتملة العظام ، قارنا مستويات السكر في الدم لدى البالغين السيارة وعدم حقن حقن وتبين أن هذا الإجراء لا يؤدي إلى حدوث ارتفاع ملحوظ في مستوى السكر في الدم.
Protocol
Discussion
حقن داخل الصفاق ينطوي على خمس خطوات : الصيام ، وزنها ، والتخدير ، والحقن ، والانتعاش. من أجل كل خطوة هناك أفضل الممارسات التي يمكن أن تضمن النجاح. النجاح يتضمن المريض الأسماك صحية ، فضلا عن تحقيق نتائج جيدة التجريبية.
الصوم : يجب أن يكون سريع لمدة 24 ساعة فارغة لمبة المعوية. يتم أخذ هذه الممارسة من الأدب الأسماك البيطرية (على سبيل المثال ، بني عام 1993). وتناقش الاعتبارات الصيام إضافية أدناه.
على المدى الطويل الصوم : لقد وجدنا أن هناك حاجة إلى سريع لمدة 72 ساعة لخفض نسبة السكر في الدم إلى مستوى خط الأساس قبل الحقن (ايمز وآخرون ، 2010). وقد وجدنا أيضا أن للدراسات الجلوكوز وهناك العديد من الإجراءات التي يلزم اتخاذها لضمان صام السمك بشكل صحيح. تبدأ دبابة النظيفة (أي حطام على الجزء السفلي). وينبغي أن تكون الدبابات حاليا ، وصفت بوضوح بوصفها "الصوم" ، وفي المكان الذي حماسة العاملين في مجال الرعاية الأسماك ولن إطعامهم. تقييم البيئة الخارجية للدبابات واتخاذ خطوات لمنع الأسماك من يجري التشديد على من الاضطرابات ، كما هو معروف الضغط لرفع مستوى السكر في الدم (تشافين ويونغ ، 1970 ؛. Groff وآخرون ، 1999). على سبيل المثال ، كان لدينا تجربة في الصوم الذي تدير إذاعية يومية على مقاعد البدلاء الذي عقد الدبابات الأسماك. وجدنا أن مستوى السكر في الدم كانت مرتفعة بشكل غير عادي وخلصت إلى أنه تم التشديد على الأسماك من الاهتزازات. آخر الضغوطات والازدحام. ينبغي أن تظل الأسماك في مناطق ذات كثافة الذي يتوافق مع الممارسات الجيدة تربية الأسماك. للتوصيات ، انظر العلامة التجارية وآخرون. (2002) وWesterfield (1995). لقد كان لدينا نتائج جيدة الصيام أسماكنا في كثافة 10-12 الأسماك في خزان 9 لتر (مع 3 طبقات من الرخام تناول بعضا من هذه الكميات). يفصل بين الجنسين قد يسبب التوتر ، لذلك نحن ننصح الحفاظ على السكان مختلط الجنس أثناء الصيام. هذا يعني أنه يمكن وضع البيض ، والبيض يجب أن يتم عزلها بحيث لا يؤكل. وهناك طريقة بسيطة لعزل البيض هو لتغطية الجزء السفلي مع دبابات 2-3 طبقات من الرخام. جودة المياه من الضروري الحفاظ على طريق إزالة النفايات والبيض وبالاستعاضة عن 10-15 ٪ من مياه الصهاريج ، يوميا. لإزالة البيض والنفايات ، وشفط تعمل بشكل جيد.
يزن : عندما تزن السمكة التي لم يتم تخدير ، وينبغي الحرص على تقليل نقل المياه من الشبكة في الكأس ، لضمان دقة وزنها. إذا نشف الشباك (مع السمك) على المناشف الورقية ، ويمكن إزالة معظم المياه الزائدة ، ويمكن قياس الوزن بدقة. قد يكون من الأسهل لتخدير الأسماك قبل وزنها ، لكننا لم تختبر الآثار المحتملة للالتخدير سمكة مرتين في يوم واحد. لقد اختبرنا أسلوبنا التي تزن السمكة الأولى مع المعاوضة / النشاف الأسلوب ثم إعادة الأسماك وزنها بعد ان تم تخديره ، ونشف بلطف الجافة. وجدنا هناك فرق كبير في الوزن بين أساليب (P = 0.7927 ، اختبار t). بالإضافة إلى ذلك ، نحن اختبار ما إذا كانت هذه المعاوضة / النشاف جلوكوز الدم الأسلوب المتضررة ، بالمقارنة مع مجرد نقل الأسماك إلى الدورق بمجرد احرز عليه (أي النشاف). وجدنا أي اختلاف كبير في مستوى السكر في الدم بين طرق نقل اثنين (P = 0.2241 ، اختبار t).
التخدير : التخدير الكيميائية قد تكون مناسبة لكثير من الدراسات. هنا قد أثبتنا المياه الباردة التخدير كبديل ، وذلك لأن العديد من التخدير (بما في ذلك tricaine/MS-222 (براون ، 1993)) ، ورفع مستوى السكر في الدم. في الدراسات السابقة ، ونحن مصممون ان المياه الباردة لا تثير السكر في الدم في الزرد (ايمز وآخرون ، 2010).
للتخدير الماء البارد ، ينبغي انخفضت درجة الحرارة ببطء. معدل الانخفاض ويبدو أن تعتمد على حجم السمك ، مع الأسماك الصغيرة تسير تحت أسرع من أكبر الأسماك. بعد الحقن ، قد نلاحظ أن الأسماك يتعافى ببطء شديد من مخدر (أنظر أدناه). وهذا يمكن أن يؤدي إما عند درجة حرارة منخفضة جدا تبدأ ، أو عندما انخفضت درجة الحرارة بشكل سريع جدا. درجة حرارة منخفضة جدا تبدأ إذا كان ينحني عند الدخول أفقيا السمك في الماء. إذا كانت درجة الحرارة ابتداء هو الصحيح ، فإن الأسماك الحفاظ على توازنه في البداية. فإنه سيتم تدوير الزعانف الصدرية والخمسين لوضع أفقي ، اللحظات ، وقد الوصاد الحركات السريعة. عادة ، فإنه السباحة. مع انخفاض درجات الحرارة ، فإن حركات الانخفاض والأسماك سوف تفقد التوازن. يتم التوصل الى طائرة من التخدير الجراحي عندما يمكن معالجة الأسماك دون رد فعل. للحفاظ على الأسماك الجراحية تحت التخدير ، ويجب أن تكون أصابعك الباردة ، وحتى تبقى منهم في الماء قبل تناول الأسماك. ويجب أيضا أن تبقى الاسفنجة الباردة في نفس درجة حرارة المياه المستخدمة للالتخدير السمك. من المهم أن تشبع الاسفنجة بالماء الذي sufficiently الباردة مرة واحدة للحفاظ على تخدير يوضع السمك على ذلك.
الحقن : الحقن قبل التعهد ، قد تحتاج إلى تشريح واحدة على الأقل للحصول على السمك الشعور سمك جدار الجسم. وهذا يمكن أن تساعدك على القاضي مدى احتياجات لادخال ابرة لدخول تجويف البطن. بالإضافة إلى ذلك ، عند إدراج الإبرة ، يمكنك أن تشعر جدار الجسم "تعطي" عندما يدخل إبرة في تجويف البطن. خلال الحقن ، واتخاذ الخطوات اللازمة لإبقاء المريض سعيدا. تأكد من الإسفنج مشبعة بالماء البارد في درجة الحرارة الصحيحة لمنع الأسماك من خلال إحياء الحقن. اسفنجة مشبعة جيدة وميسرة مهم لتقليل الأضرار التي لحقت المقاييس والمخاط الذي يغطي الجلد. اسفنجة مشبعة جيدا المهم أيضا من أجل الحفاظ على الخياشيم الهوائية. نحن نوصي بشدة الاسفنجة رغوة الواردة أسماؤهم أدناه تحت المواد. أخيرا ، وبمجرد أن يتم تخدير الأسماك ، والعمل بسرعة لتقليل الوقت الذي الأسماك تحت.
الانتعاش : السمكة ينبغي على التعافي من التخدير تقريبا عند دخول خزان المياه الدافئة. إذا كان السمك لا يبدأ السباحة على الفور ، بلطف عباب الماء نحو الخياشيم لسرعة الانتعاش. إذا كان الانتعاش بطيئا ، ثم ذهب الأسماك تحت بسرعة كبيرة جدا ويجب عليك ضبط الإجراء التخدير بشكل مناسب. ويناقش الأسباب المحتملة من الانتعاش البطيء تحت التخدير.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذه الدراسة عن مرض السكري الأحداث منحة مؤسسة البحوث 5-2007-97 (لVEP) ، عن طريق المعهد الوطني للسكري وأمراض الجهاز الهضمي والكلى المنح R01DK064973 (لVEP) ، R01DK48494 (لLHP) ، T32DK07074 (دعم SCE) ، K01DK083552 (لMDK) ، وP60DK20595 لجامعة شيكاغو أبحاث السكري ومركز التدريب. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للجوائز كبيرة أو في المعاهد الوطنية للصحة.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Foam Sponge | Jaece Industries | L800-D | ||
| 60 mm Petri dish | ||||
| Pipet tip box lid | not too deep, e.g. 1.5 cm | |||
| Plastic storage container | deep, e.g. 7 cm | |||
| Thermometer | ||||
| Crushed ice | made from facility water | |||
| Warm facility water | 1 liter or more | |||
| 500 ml beaker | for weighing | |||
| NanoFil syringe | World Precision Instruments (WPI) | NANOFIL | or Hamilton syringe | |
| 35 gauge needle | WPI | NF35BV-2 | beveled | |
| Silflex tubing | WPI | SILFLEX-2 | ||
| UltraMicroPump III and Micro4 controller | WPI | UMPS-1 | ||
| Foot switch | WPI | 15867 | ||
| Dissecting microscope | ||||
| Plastic wrap | ||||
| Paper towels | ||||
| Cortland salt solution |
References
- Perry, S. F., Davie, P. S., Daxboeck, C., Ellis, A. G., Smith, D. G., Hoar, W. S., Randall, D. J. Perfusion methods for the study of gill physiology. Fish Physiology Volume X: Gills, Part B: Ion and Water. , 325-388 (1984).
- Brown, L. A., Stoskopf, M. K. Anesthesia and restraint. Fish Medicine. , 79-90 (1993).
- Eames, S. C., Philipson, L., Prince, V. E., Kinkel, M. D. Blood sugar measurement in zebrafish reveals dynamics of glucose homeostastis. Zebrafish. 7, 205-213 (2010).
- Chavin, W., Young, J. E. Factors in the determination of normal serum glucose levels of goldfish Carassius auratus L. Comp Biochem Physiol. 33, 629-653 (1970).
- Groff, J. M., Zinkl, J. G. Hematology and clinical chemistry of cyprinid fish. Common carp and goldfish. Vet Clin North Am Exot Anim Pract. 2, 741-776 (1999).
- Brand, M., Granato, M., Nusslein-Volhard, C., Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. Keeping and raising zebrafish. Zebrafish: A Practical Approach. , 7-37 (2002).
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book. , (1995).
- Iwama, G. K., Ackerman, P. A., Hochachka, P. W., Mommsen, T. P. Anaesthetics. Biochemistry and Molecular Biology of Fishes, Volume 3: Analytical Techniques. , 1-15 (1994).
- Reavill, D. R. Common diagnostic and clinical techniques for fish. Vet Clin North Am Exot Anim Pract. 9, 223-235 (2006).
- Stoskopf, M. K., Stoskopf, M. K. Surgery. Fish Medicine. , 91-97 (1993).
