Неинвазивная Визуализация лейкоцитов самонаведения и миграции В естественных условиях</em
Summary
Здесь мы описываем неинвазивных двухфотонного (2P) микроскопии подход к изучению лейкоцитов самонаведения в пятом мыши. Мы обсуждаем технические аспекты нашей подготовки изображений тканей и ходить читателя через типичном эксперименте от первоначального созданной для коллекции исполнения и данных.
Abstract
Двухфотонное (2P) микроскопии высокой техникой визуализации резолюции, который был широко адаптирован биологов. Значение 2P микроскопии является то, что он обеспечивает богатую пространственно-временной информации о ячейке поведения в пределах здоровых тканей, и в живых мышей. Лейкоцитов вербовки играет важную роль в защите организма от инфекции, и когда не остановить, может внести вклад в воспалительных и аутоиммунных заболеваний. Изучение лейкоцитарной вербовки в естественных условиях является технически сложным поскольку клетки быстро движется внутри сосудов, расположенных глубоко внутри тканей светом рассеяния. На сегодняшний день большинство прижизненных изображений исследования требуют хирургического подготовки подвергать кровеносных сосудов и тканей. Чтобы избежать повреждения тканей и воспаления индуцированные самой операцией, здесь мы опишем неинвазивных одноклеточных изображений подход, который может быть использован для изучения лейкоцитов торговли пяте мыши и фаланг пальцев. Мы обсуждаем технические аспекты нашей подготовки изображений 2P и ходить читателя через типичном эксперименте от первоначального созданной для коллекции исполнения и данных.
Protocol
Discussion
В этом видео мы продемонстрируем протокол процедуры для неинвазивной визуализации 2P лейкоцитов вербовки в ответ на воспаление.
Пяте является классическим физиологических сайт для изучения воспаления, таких как аллергии, инфекции и аутоиммунные заболевания 4-7. 2P …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана NIH грант R01-3155-53502 и Вашингтонского университета, Pfizer биомедицинских исследований Соглашения.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
- Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96, 719-726 (2000).
- Zinselmeyer, B. H., Lynch, J. N., Zhang, X., Aoshi, T., Miller, M. J. Video-rate two-photon imaging of mouse footpad – a promising model for studying leukocyte recruitment dynamics during inflammation. Inflamm Res. 57, 93-96 (2008).
- Zinselmeyer, B. H., Dempster, J., Wokosin, D. L., Cannon, J. J., Pless, R., Parker, I., Miller, M. J. Chapter 16. Two-photon microscopy and multidimensional analysis of cell dynamics. Methods Enzymol. 461, 349-378 (2009).
- Gray, D. F., Jennings, P. A. Allergy in experimental mouse tuberculosis. Am Rev Tuberc. 72, 171-195 (1955).
- Lin, A., Loughman, J. A., Zinselmeyer, B. H., Miller, M. J., Caparon, M. G. Streptolysin S inhibits neutrophil recruitment during the early stages of Streptococcus pyogenes infection. Infect Immun. 77, 5190-5201 (2009).
- Smith, C. J., Zhang, Y., Koboldt, C. M., Muhammad, J., Zweifel, B. S., Shaffer, A., Talley, J. J., Masferrer, J. L., Seibert, K., Isakson, P. C. Pharmacological analysis of cyclooxygenase-1 in inflammation. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13313-13318 (1998).
- Wipke, B. T., Allen, P. M. Essential role of neutrophils in the initiation and progression of a murine model of rheumatoid arthritis. J Immunol. 167, 1601-1608 (2001).
- Baez, S. An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy. Microvasc Res. 5, 384-394 (1973).
- Mempel, T. R., Scimone, M. L., Mora, J. R., von Andrian, U. H. in vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues. Curr Opin Immunol. 16, 406-417 (2004).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2604-2609 (2003).
