Non invasiva di imaging di homing dei leucociti e la migrazione In vivo</em
Summary
Qui, descriviamo un non-invasiva a due fotoni (2P) approccio microscopia per lo studio dei leucociti homing nella zampa del mouse. Discutiamo gli aspetti tecnici della nostra preparazione dei tessuti di imaging e camminare il lettore attraverso un tipico esperimento di configurazione iniziale di esecuzione e di raccolta dei dati.
Abstract
A due fotoni (2P) microscopia è una tecnica di imaging ad alta risoluzione che è stata ampiamente adattato dai biologi. Il valore di microscopia 2P è che fornisce ricche informazioni spazio-temporali per quanto riguarda i comportamenti delle cellule all'interno dei tessuti intatti e in topi vivi. Reclutamento dei leucociti svolgono un ruolo importante nella difesa dell'ospite contro le infezioni e quando incontrollato, può contribuire a malattie infiammatorie e autoimmuni. Studiare il reclutamento dei leucociti in vivo è tecnicamente impegnativo poiché le cellule si spostano rapidamente all'interno dei vasi situato in profondità all'interno dei tessuti dispersione della luce. Fino ad oggi, gli studi di imaging più intravitale richiedono una preparazione chirurgica per esporre i vasi sanguigni e dei tessuti. Per evitare il danno ai tessuti e l'infiammazione indotta da un intervento chirurgico se stessa, qui, si descrive un non-invasiva a cella singola approccio di imaging che può essere utilizzato per studiare il traffico dei leucociti nella zampa del mouse e falangi. Discutiamo gli aspetti tecnici della nostra preparazione 2P imaging e camminare il lettore attraverso un tipico esperimento di configurazione iniziale di esecuzione e di raccolta dei dati.
Protocol
Discussion
In questo protocollo video dimostriamo le modalità di imaging non invasiva 2P di reclutamento dei leucociti in risposta all'infiammazione.
La zampa è un sito classico fisiologici per lo studio dell'infiammazione come la malattia di allergie, infezioni e autoimmuni 4-7. 2P di imaging fornisce un quadro dettagliato delle fasi distinte nei percorsi traffico dei leucociti, dal rotolamento e adesione nei vasi sanguigni di chemiotassi ai siti delle funzioni effettrici. Abbiamo…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto da NIH concedere R01-3155-53502 e Washington University-Pfizer accordo Ricerca Biomedica.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
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