白细胞的归位和迁移的非侵入性的成像在体内</em
Summary
在这里，我们描述了一种非侵入性的双光子显微镜（2P）的方法来研究白细胞在鼠标脚垫的归巢。我们将讨论我们的组织成像中的技术方面的准备，然后步行通过设立执行和数据收集的实验，从最初的典型读者。
Abstract
双光子显微镜（2P）是一种高分辨率的成像技术，已被广泛生物学家适应。 2P显微镜的价值是，它提供了丰富的时空内完整的组织和细胞在活体小鼠行为的信息。白细胞招聘中起着重要的作用在宿主防御感染和未选中时，可以促进炎症和自身免疫性疾病。研究在体内的白细胞招聘是在技术上具有挑战性，因为细胞正在迅速在位于深内光散射组织的船只。迄今为止，大多数活体成像研究需要手术的准备，暴露的血管和组织。为了避免手术本身引起的组织损伤和炎症，在这里，我们描述了一种非侵入性的单细胞成像的方法，可用于研究白细胞贩运鼠标脚垫和指骨。我们讨论了我们的2P成像准备的技术方面和读者穿行典型的从最初的成立，以执行和数据采集的实验。
Protocol
1。动物的准备： 这个协议采用成年雌性成年LysM – EGFP小鼠，其中中性粒细胞和巨噬细胞的荧光标记1 EGFP的表达。 血管标签： 为了形象化血管，非针对性的量子点15μl（655nm）稀释成100μL的PBS和鼠标前成像10-30分钟静脉注射注入。 麻醉： 将鼠标在兽医吸入麻醉诱导系统（贵族医疗服务，INC）室。 将蒸发器，以3-4％的异氟醚和…
Discussion
在此视频协议中，我们展示了在炎症反应中白细胞招聘2P非侵入性成像程序。
脚垫是一个经典的研究，如过敏，感染和自身免疫性疾病4-7发炎的生理网站。 2P的成像提供了一个详细的图片，滚动和粘附在血管效应功能的网站趋化白细胞贩运途径不同的步骤。我们发现，针对不同类型的炎症刺激白细胞招聘的变化。刺激的剂量应慎重选择，每次尝试复述一种生理性的侮?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由美国国立卫生研究院授予R01 – 3155 – 53502和华盛顿大学辉瑞生物医学研究协议的支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
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Tags
Non-invasive ImagingLeukocyte HomingLeukocyte MigrationIn Vivo ImagingTwo-photon MicroscopyHigh Resolution ImagingCell BehaviorLive MiceLeukocyte RecruitmentHost DefenseInfectionInflammatory DiseasesAutoimmune DiseasesIntravital ImagingSurgical PreparationBlood VesselsInflammationNon-invasive Single-cell ImagingLeukocyte TraffickingMouse Footpad And Phalanges
Citer Cet Article
Wang, B., Zinselmeyer, B. H., McDole, J. R., Gieselman, P. A., Miller, M. J. Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo. J. Vis. Exp. (46), e2062, doi:10.3791/2062 (2010).