Mechanische dissociatie: een methode om levensvatbare cellen uit een weefsel te verkrijgen
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Garaud et. al., A Simple and Rapid Protocol to Non-enzymaticly Dissociate Fresh Human Tissues for the Analysis of Infiltrating Lymphocytes. Drs. J. Vis. Exp. (2014).
Deze video beschrijft de niet-enzymatische dissociatie van vers menselijk weefsel om levensvatbare cellen te verkrijgen. De techniek wordt gebruikt voor kwalitatieve en kwantitatieve analyse van CD45 positieve cellen (lymfocyten/leukocyten) aanwezig in verschillende normale en kwaadaardige menselijke weefsels.
Protocol
1. Bereiding van het weefselhomogenaat Ontleed geresectiede weefsels (kwaadaardig en normaal weefsel gereseceerd uit de operatiekamer) bevinden zich in het pathologielab door opgeleid personeel voor onmiddellijke pick-up. Tumor, NANT (zo ver mogelijk van de tumor verwijderd) en normale weefselfragmenten worden routinematig verwerkt binnen 1 – 3 uur na chirurgische excisie in een BSL2-laboratorium met behulp van standaard bioveiligheidsprocedures voor menselijke weefsels. Een stroomschema van het protocol wordt …
Representative Results
Figuur 1: Protocolstroomdiagram. Onze procedure voor het verwerken van verse menselijke weefsels en enkele analytische benaderingen die vervolgens kunnen worden gebruikt om lymfocyten te beoordelen die menselijke weefsels infiltreren, worden getoond. Figuur 2: H&E bevlekte afbeelding van een borsttumor …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Citer Cet Article
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).