حقن الجنين الدقيق: تقنية لتسليم مركب في صفار حمار وحشي
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: سورلين، إ. ل. وآخرون. كفاءة الإنتاج وتحديد CRISPR /Cas9 ولدت جينية خروج المغلوب في نظام نموذج دانيو rerio. ج. فيس إكسب. (2018).
يصف هذا الفيديو تقنية حقن الجنين الدقيق لتسليم المركبات إلى كيس صفار حمار وحشي.
Protocol
1. microinjection من مكونات CRISPR في أجنة حمار وحشي إنشاء خزانات التربية في الليلة السابقة للحقن عن طريق وضع عدد من الذكور والإناث المطلوب (عادة 2 الإناث و 1 أو 2 الذكور) في خزان تربية مع مقسم في مكان. إعداد لوحة microinjection مع 1.5٪ agarose في 1x E3 وسائل الإعلام (انظر جدول المواد) مع 0.01٪ الميثيل…
Representative Results
الشكل 1: مقارنة صحة 24 جنينا تم حقنها. الجنين الحي (A) الذي تم تطويره إلى 24 حصان، يتميز بسهولة عن الجنين الذي أجهض النمو (B). يجب إزالة الأجنة التي تشبه (B) أو التي غيرت الميزات بشكل كبير إلى (A) ، مثل انحناء العمود الفقري أو نمو الرأس والعين ال?…
Materials
| RNase-free water | Any brand | Synthesis of guide RNAs. Thermo Fisher and Qiagen both carry suitable water. |
|
| E3 embryo media | Made in house | Media for raising embryos and making injeciton plate. Recipe: http://cshprotocols.cshlp.org/ content/2011/10/pdb.rec66449 |
|
| Methylene Blue | Sigma-Aldrich | M9140 | Added to 1x E3 media to prevent fungal growth on embryos. |
| Petri dish | Thermo Fisher | FB0875711Z | Store embryos, cast injection plate |
| Agarose | Denville | CA3510-8 | Casting injection plate, agarose gels. |
| Microinection mold | Adaptive Science Tools | TU-1 | To create wells to hold embryos during injection |
| Phenol Red | Sigma-Aldrich | P0290 | Dye for visualization of injection |
| Mineral Oil | Sigma-Aldrich | M5904-5ML | To calibrate needle injection volume. |
| Transfer pipettes | Any brand | Moving embryos | |
| Razor blade | Thermo Fisher | 11295-10 | Cutting injection needle, tail clipping adult fish. |
| Incubator | Maintaining embryos at 28.5 C. | ||
| Verticle pipette puller | David Kopf Instruments | 700C | Geneate needles for injection. Additional needle pulling instructions: http:// cshprotocols.cshlp.org/ content/2006/7/pdb.prot4651.long |
| Capillary tubes | Sutter Instruments | BF100-58-10 | Geneate needles for injection. |
| Microloader tips | Eppendorf | 930001007 | Load solution into injection needles |
| Microinjector | World Precision Instruments | PV 820 | Injecting embryos. |
| Disecting microscope | Leica | Injecting embryos. | |
| Microwave | Any brand | Casting injection plate, agarose gels. | |
| Scale | Any brand | Casting injection plate, agarose gels. | |
| Gloves | Any brand | For all aspects of the protocol. | |
| N2 | Any brand | To expell liquid from the capillary for embryo injection | |
| PCR strip tubes | Any brand | For all aspects of the protocol. | |
| 200 µL tips | Any brand | For all aspects of the protocol. | |
| 10 µL tips | Any brand | For all aspects of the protocol. | |
| Micropipettes | Any brand | For all aspects of the protocol. |
Citer Cet Article
Embryo Microinjection: A Technique to Deliver a Compound into the Zebrafish Yolk. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20196, doi: (2023).