Montagem de Ágar: Um método básico de montagem de embriões de zebrafish vivos para imagens de longo prazo
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hagedorn E. J., et al. Geração de Embriões de Zebrafish Parabióticos por Fusão Cirúrgica de Blastulae Em desenvolvimento. J. Vis. Exp. (2016).
Este vídeo descreve instruções passo a passo sobre a montagem de embriões de zebrafish vivos em 6 placas de poço usando baixa ágarose derretido. Ele também fornece o processo para adquirir imagens de embriões vivos e analisá-lo usando software.
Protocol
1. Configuração de microscópio, Aquisição de Imagens, Processamento e Análise Prepare 0,8% de baixo ponto de fusão (LMP) agarose: Adicione 0,8 g LMP agarose a 100 ml E3 e aqueça até dissolver totalmente. Enquanto quente, aliquot 1 ml de LMP agarose em tubos de microfugem de 1,5 ml em um bloco de aquecimento de 37 °C. A agarose LMP permanecerá derretida a 37 °C. Adicione 40 μl de 4 mg/ml (25x), pH 7,0 tricaine a cada 1 ml de LMP agarose a 37 °C. NOTA: Se trabalhar…
Materials
| LMP agarose (Ultrapure LMP agarose) | Invitrogen | 16520100 |
| Tricaine (powder) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S) | Western Chemical Inc | MS 222 |
| Glass-bottom 6-well plates used for imaging | MatTek | P06G1.5-20-F |
| 10 ml pipette pump (green) (Pipette Pump Pipettor) | Novatech International | F37898-0000 |
Citer Cet Article
Agar Mounting: A Basic Method of Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20187, doi: (2023).