Gerichte leverablatie: inducerende hepatocytdood met metronidazol in transgene zebravislarven
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Choi T.Y., et al. Hepatocyt-specifieke ablatie bij zebravissen om galgestuurde leverregeneratie te bestuderen. J.Vis. Exp. (2015)
Het artikel beschrijft gerichte leverablatie, een methode voor het induceren van hepatocytdood met metronidazol in transgene zebravislarven. Het monsterprotocol beschrijft het proces voor het genereren, manipuleren en beoordelen van gerichte leverablatie bij zebravissen.
Protocol
1. Bereiding van embryo’s/larven Breng 100 embryo’s over in een petrischaaltje van 100 mm met 25 ml eiwater. Bewaar niet meer dan 100 embryo’s per petrischaaltje en verhoog ze op 28 °C. Om pigmentatie te remmen, voegt u fenylthiourea (PTU) toe aan de petrischalen vóór 10 uur na de bevruchting (hpf) en verhoogt u embryo’s/larven tot 80 hpf. De uiteindelijke concentratie van PTU is 0,2 mM.LET OP: PTU is giftig. Gebruik in overeenstemming met de juiste behandelingsrichtlijnen.</li…
Materials
| 3-amino benzoic acid ethyl ester (Tricaine) powder | Sigma-Aldrich | A5040 | Make 0.4% (15 mM) tricaine stock : Bring 0.4 g tricaine to 100 mL with egg water. Adjust to pH 7. |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| Metronidazole | Sigma-Aldrich | M1547 | |
| N-Phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | |
| 100 x 15 mm petri dish | Denville Scientific Inc. | M5300 | |
| egg water | 0.3 g/L of sea salts ‘Instant Ocean’ and 0.5 mM CaSO4 in distilled water. | ||
| epifluorescence microscope | Leica Microsystems | M205FA |
Citer Cet Article
Targeted Liver Ablation: Inducing Hepatocyte Death with Metronidazole in Transgenic Zebrafish Larvae. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20181, doi: (2023).