Fitc-Dextran Alimentación: Un método para cuantificar la permeabilidad intestinal en C. elegans
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Le, T. A. N., et al. Medición de los efectos de bacterias y productos químicos sobre la permeabilidad intestinal de Caenorhabditis elegans. J. Vis. (2019).
Este video introduce un método para visualizar y medir la integridad del lúmenes intestinales C. elegans alimentando gusanos con etiqueta FITC dextrano. El protocolo de ejemplo muestra el ensayo realizado con gusanos tratados con 3,3′-diindolylmethane (DIM) y alimentados con patógenos.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Le et al, Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans, J. Vis. (2019). Preparación de placas NGM para probar los efectos de un químico (DIM) en la permeabilidad intest…
Representative Results
Figura 1: El efecto de DIM en la permeabilidad intestinal de C. elegans alimentado P. aeruginosa. Imágenes microscópicas de gusanos de (A) E. coli OP50 sin alimentación FITC-dextran, (B) E. coli con alimentación FITC-dextrano, (C) P. aerugin…
Materials
| 3,3’-diindolylmethane | Sigma | D9568 | |
| 90×15 mm Petri dishes | SPL Life Sciences, South Korea | 10090 | |
| Bactor Agar | Beckton Dickinson | REF. 214010 | |
| Formaldehyde solution | Sigma | F1635 | |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Cholesterol | Sigma | C3045 | |
| Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene | Corning Incorporated | REF. 3631 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Fluorescein isothiocyanate – dextran | Sigma | FD10S | |
| Harmony software | PerkinElmer | verson 3.5 | |
| Magnesium sulfate heptahydrate | Fisher Bioreagents | BP2213-1 | |
| Fluoromount aqueous mounting medium | Sigma | F4680 | |
| Operetta CLS High-Content Analysis System | PerkinElmer | HH16000000 | |
| Peptone | Merck | EMD 1.07213.1000 | |
| Pseudomonas aeruginosa PA01 | Korean Collection for Type Culture | KCTC NO. 1637 | |
| Sodium Chloride | Fisher Bioreagents | BP358-1 | |
| Stereo Microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
Citer Cet Article
FITC-Dextran Feeding: A Method to Quantify Intestinal Permeability in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20167, doi: (2023).