酵素消化と手動解離:細胞培養のための C.エレガンス 胚を準備する方法
Published: April 30, 2023
Abstract
出典:サンガレッティ、R.とビアンキ、L. 胚性C.エレガンス細胞を培養するための方法。 J. ヴィス・エクス(2013).
このビデオでは、インビトロで胚性C.エレガンス細胞を単離し、無菌培養する方法を紹介します。
Protocol
1. 胚細胞解離 層流フードを使用して滅菌条件下で手順の次のステップを行います。動物は細菌プレートにガウンを着ているが、漂白剤を含む溶解溶液による溶解と治療は、すべての細菌ではないにしても、最も排除すべきである。したがって、手順のこの時点で層状フードを使用すると、卵の懸濁液の新たな汚染を防ぐことができます。 ペレット化した卵を1mlの2…
Representative Results
図 1.C.エレガンス胚は、チチナーゼ治療の前後に起こる。(A)チチナーゼに曝される前の卵の写真。矢印は、胚を取り巻く透明で無傷の卵殻を指しています。(B)卵を10分間、チチナーゼで処理した。卵殻は消化され、胚の周りにはもはや見えません。矢印は卵殻?…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Citer Cet Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).