Digestion enzymatique et dissociation manuelle : une méthode pour préparer les embryons de C. elegans à la culture cellulaire
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Sangaletti, R. et Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J. Vis. Exp. (2013).
Cette vidéo introduit une méthode pour isoler et culturer stérilement les cellules embryonnaires de C. elegans in vitro.
Protocol
1. Dissociation des cellules embryonnaires Effectuer les prochaines étapes de la procédure dans des conditions stériles à l’aide d’un capot d’écoulement laminaire. Alors que les animaux sont robe sur les plaques de bactéries, les lavages et le traitement avec la solution de lyse contenant de l’eau de Javel devrait éliminer la plupart sinon toutes les bactéries. Ainsi, l’utilisation d’une hotte laminaire à ce stade de la procédure empêche une nouvelle contamination de la s…
Representative Results
Figure 1. Embryons de C. elegans avant et après le traitement de chitinase. (A) Photographie des œufs avant l’exposition à la chitinase. La flèche indique la coquille d’œuf transparente et intacte entourant un embryon. (B) Oeufs traités avec chitinase pendant 10 min. Les coquilles d’œufs ont été digérées et ne sont plus visibl…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Citer Cet Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).