Il metodo ureasi di preparazione dei campioni per GC / MS dei metaboliti di intermediazione è presentato dal suo inventore. Il metodo permette di one-step di follow-up di screening neonatale per errori congeniti mediante spettrometria di massa tandem dai carboidrati quantificazione, organici e aminoacidi tutti in un unico processo.
Ogni bambino nato negli Stati Uniti è ora proiettato fino a 42 malattie rare genetiche chiamate "errori congeniti del metabolismo". Il metodo di screening si basa sulla spettrometria di massa tandem e quantifica acilcarnitine come schermo per acidemias organici e misure anche aminoacidi. Tutti gli stati anche eseguire il test enzimatico per i disturbi di carboidrati come la galattosemia. Perché i risultati possono essere non specifici, test di follow-up dei risultati positivi è necessario utilizzare un metodo più definitiva. La presente relazione descrive il metodo "ureasi" di preparazione dei campioni per lo screening errore congenito. Enzima ureasi cristallino è utilizzato per rimuovere l'urea da fluidi corporei che permette maggior parte degli altri metaboliti solubili in acqua da disidratare e derivatizzati per gascromatografia in un unico procedimento. Disidratazione per evaporazione in corrente di azoto è facilitato con l'aggiunta di acetonitrile e cloruro di metilene. Poi, trimethylsilylation avviene in presenza di un unico catalizzatore, trifluoroacetato triethylammonium. Iniezione automatizzato e cromatografia è seguito da macro-driven quantificazione usanza di 192 metaboliti e semi-quantificazione di ogni componente principale utilizzando librerie specializzate di spettri di massa di TMS derivatizzati composti biologici. L'analisi può essere eseguita sul ampiamente utilizzato piattaforma Chemstation utilizzando le macro e librerie disponibili da parte dell'autore. Nel nostro laboratorio, oltre 16.000 campioni di pazienti sono stati analizzati utilizzando il metodo con una resa diagnostica di circa il 17% – vale a dire il 17% dei campioni risultati rivelano che i risultati dovrebbero essere attuate da parte del medico di ordinazione. Inclusi in queste oltre 180 sono gli errori confermata congeniti, di cui circa il 38% non avrebbe potuto essere diagnosticata con metodi precedenti.
Il metodo di ureasi (1) è stato citato 62 volte nella letteratura medica con varie modifiche. Gruppo di Matsumoto (2,3) ha semplificato la procedura per l'high-throughput screening neonatale e riportato i risultati da 16000 pazienti. Kuhara e altri (4-7) hanno riportato l'utilizzo del metodo in diversi casi di diagnosi degli errori congeniti e follow-up. Rhead (8) ha confermato l'utilità del metodo per la diagnosi clinica e follow-up di errori congeniti. Il metodo è stato applicato a urina di orsi, topi knock-out, elefanti e omogenati di mosche frutti interi e le loro larve (9). Terreni di coltura da Cryptococcus prima e dopo la mutagenesi sito-diretta sono stati analizzati, senza il passaggio ureasi (10). Il metodo è stato applicato per la valutazione dei nutrizionale studenti di medicina, pazienti con sindrome di Down e anziani dementi veterani dopo aver caricato i soggetti con dosi orali degli aminoacidi triptofano, metionina ed isoleucina (11). Tutti gli otto vitamine del gruppo B sono stati valutati da quantificare il prodotti di degradazione dei tre aminoacidi che, tra i quali, che tutte le 8 vitamine ad un certo punto della loro degradazione. Gli effetti tossici dei farmaci e la loro mitigazione da supplementazione di vitamina è stata riportata (12). Campioni di liquido amniotico da gravidanze normali e sindrome di Down sono stati analizzati e riportati (13-15).
The authors have nothing to disclose.
L'assistenza tecnica in grado di Anthony Thomas Si ringrazia.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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MSD 5975 | Agilent | GC/MS/Computer | ||
MSD 5973 | Agilent | GC/MS/Computer | ||
Urease | Calzyme | 116A0100 | Also Sigma C3 | |
Stable Isotope Standards | CDN Isotopes, Isotec, Cambridge Isotope Lab | |||
Solvents | Fisher | |||
Analytes | Sigma, Universidad Autonoma de Madrid, Ernesto Brunet | |||
GC Columns | J&W Scientific | 123-5026 | ||
TEA/TFA | Fluka/Sigma | 09747 | ||
Vials | Supelco/Sigma | Z115088/12EA | ||
Merlin Microseal | Agilent | 5181-8815 | ||
MSTFA | Thermal Scientific | 48913 |