Placage RNAi pour l’alimentation de C. elegans : Une technique pour induire l’expression cible dsRNA dans E. coli
Published: April 30, 2023
Abstract
Source: Kolundzic, E., et autres. Application de l’ARNi et de l’expression du facteur de transcription induite par le choc thermique pour reprogrammer les cellules germinales aux neurones de C. elegans. J. Vis. Exp. (2018).
Cette vidéo décrit les principes derrière le traitement RNAi dans C. elegans et démontre un protocole pour abattre lin-35 dans une souche de ver transgénique.
Protocol
Ce protocole est extrait de Kolundzic, et coll., Application of RNAi and Heat-shock-induit Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans, J. Vis. Exp. (2018). Préparation des solutions Plaques NGM-Agar (1 L) Ajouter 3 g de NaCl, 2,5 g de peptone (p. ex., Bacto-Peptone) et 20 g …
Representative Results
Figure 1 : Phénotype de Pvul provoqué par RNAi contre lin-53. (En haut) Image DIC des vers de descendance F1 de stade L4/jeune adulte dérivés de la lutte ou des mères traitées par lin-53 RNAi. Barres d’échelle = 20 μm. (Bottom) Les animaux traités avec lin-53 RNAi affichent la vulve saillante(pvul)phénotype (têtes de flèches noires). Le phénotype de pvul …
Materials
| Chemicals | |||
| Agar-Agar, Kobe I | Roth | 5210.1 | |
| Bactopeptone | A. Hartenstein GmbH | 211 677 | Peptone Media |
| Yeast extract | AppliChem | A1552,0100 | |
| Amphotericin B | USBiological | A2220 | |
| CaCl2 | Merck Biosciences | 208290 | |
| Cholesterol | Roth | 8866.2 | |
| Gelatine | Roth | 4275.3 | |
| IPTG | Sigma | 15502-10G | |
| K2PO4 | Roth | T875.2 | |
| KH2PO4 | Roth | 3904.2 | |
| MgSO4 | VWR | 25,163,364 | |
| Na2HPO4 | Roth | P030.1 | |
| NaCl | Roth | 9265.1 | |
| NaClO | Roth | 9062.3 | |
| NaOH (5 N) | Roth | KK71.1 | |
| Tris | Roth | AE15.2 | |
| Carbenicillin | Roth | 634412 | |
| Tetracycline | Roth | 2371.2 | |
| Incubators | |||
| Incubator | Sanyo MIR-5 | 5534210 | for maintenance of worm strains at 15 °C or 25 °C |
| Microscopes | |||
| Stereomicroscope | SMZ745 | Nikon | |
| Bacterial strains | |||
| Escherichia coli HT115 | F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAseIII minus). | ||
| Escherichia coli OP50 | Uracil auxotroph E. coli strain | ||
| Worm strains | |||
| BAT28: otIs305 (hsp16.2prom::che-1::3xHA) ntIs1 (gcy-5prom::gfp) V. | derived from OH9846 by 4x times more back crossing with N2 | ||
| RNAi Clones | |||
| lin-53 | SourceBioscience | ID I-4D14 | Ahringer library 16B07 ChromI, K07A1.12 |
| empty vetor: L4440 | Addgene | #1654 |
Citer Cet Article
RNAi Plating for C. elegans Feeding: A Technique to Induce Target dsRNA Expression in E. coli. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20138, doi: (2023).