Ethanolfixatie en DAPI-kleuring: een methode om DNA in C. elegans te visualiseren
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Clarke, E. K., et al. Manipulatie van Ploidy in Caenorhabditis elegans. J.Vis. Exp. (2018).
Hier beschrijven we een techniek die wordt gebruikt om genomisch DNA te visualiseren in vaste, intacte nematoden. De video bevat een voorbeeldprotocol om chromatine te tellen in onbevruchte C. elegans-oöcyten.
Protocol
Dit protocol is een fragment uit Clarke et al, Manipulatie van Ploidy in Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2018). Tetraploïde stammen kunnen worden gevalideerd door het aantal chromosomen in hun onbevruchte oöcyten te tellen. Fluorescerende microscopie kan worden gebruikt om te screenen op het aantal chromosoomparen in onbevruchte diploïde oöcyten (voorafgaand aan …
Materials
| Dissecting Microscope | Motic Microscopy | SMZ171 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Staining | |||
| Hoechst 33258, Pentahydrate | Biotium | 40045 | |
| DAPI | Biotium | 40011 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ethanol Fixation | |||
| Ethanol, Pure, 190 Proof (95%), USP | Koptec, VWR | 89125-166 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| M9 Buffer | |||
| Sodium chloride, Biotechnology Grade | VWR | 97061-278 | |
| Potassium phosphate, Monobasic Anhydrous Grade | VWR | 97062-346 | |
| Sodium phosphate, monobasic dihydrate | Fisher Scientific | AC271750025 |
Citer Cet Article
Ethanol Fixation and DAPI Staining: A Method to Visualize DNA in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20136, doi: (2023).