Fixação de etanol e Coloração DAPI: Um método para visualizar DNA em C. elegans
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Clarke, E. K., et al. Manipulação de Ploidy em Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2018).
Aqui, descrevemos uma técnica usada para visualizar DNA genômico em nematoides fixos e intactos. O vídeo inclui um protocolo de exemplo para contar cromatina em oócitos C. elegans não fertilizados.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Clarke et al, Manipulação de Ploidy em Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2018). As cepas tetraploides podem ser validadas contando o número de cromossomos em seus oócitos não fertilizados. A microscopia fluorescente pode ser usada para testar o número de pares de cromossomos em oócitos diploides não fertilizados (antes das divisõ…
Materials
| Dissecting Microscope | Motic Microscopy | SMZ171 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Staining | |||
| Hoechst 33258, Pentahydrate | Biotium | 40045 | |
| DAPI | Biotium | 40011 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ethanol Fixation | |||
| Ethanol, Pure, 190 Proof (95%), USP | Koptec, VWR | 89125-166 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| M9 Buffer | |||
| Sodium chloride, Biotechnology Grade | VWR | 97061-278 | |
| Potassium phosphate, Monobasic Anhydrous Grade | VWR | 97062-346 | |
| Sodium phosphate, monobasic dihydrate | Fisher Scientific | AC271750025 |
Citer Cet Article
Ethanol Fixation and DAPI Staining: A Method to Visualize DNA in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20136, doi: (2023).